[发明专利]一种改良的胱抑素C检测试剂盒

权利要求书

1.一种胱抑素C检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2，所述试剂R1主要由缓冲液1、稳定剂1、防腐剂1、EDTA、增凝剂和保护剂1组成；所述试剂R2主要由交联胱抑素C抗体的聚苯乙烯胶乳微球、缓冲液2、稳定剂2、防腐剂2、保护剂2组成，其中聚苯乙烯胶乳微球与胱抑素C抗体之间以共价交联方式连接。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的缓冲液1选自Hepes缓冲液、Tris-HCl缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼砂缓冲液中的任意一种或多种的组合，其pH为7.0～9.0，浓度为25～500mmol/L；所述试剂R2中的缓冲液2选自PBS缓冲液、硼砂缓冲液、甘氨酸缓冲液、Hepes缓冲液、GOODS缓冲液、MOPS缓冲液中任意一种或多种的组合，其pH为7.0～9.0，浓度为25～500mmol/L。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的缓冲液1包括下列组分：水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠和甘氨酸，且水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠、甘氨酸的总浓度为3.5－7.5g/L，生物缓冲液1的pH值为7.2－7.6。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的稳定剂1选自KCl、NaCl、CaCl₂中的任意一种或多种的组合，其质量浓度为0.5％～10％；所述试剂R2中的稳定剂2采用离子稳定剂和悬浮稳定剂配合使用；其中离子稳定剂为NaCl、KCl、Na₂CO3、Na₂SO4或者K₂SO4，悬浮稳定剂为PEG8000、蔗糖、甘油或者葡萄糖。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的防腐剂1为叠氮钠、硫柳汞或者ProClin300；所述试剂R2中的防腐剂2为叠氮钠、硫柳汞或ProClin300。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的增凝剂为PEG8000或者葡聚糖。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中的聚苯乙烯乳胶微球的表面官能团为氨基、羧基、酰肼、醛基或环氧基，聚苯乙烯乳胶微球的的粒径在100～600nm。

8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的保护剂1为牛血清白蛋白；所述试剂R2中的保护剂2为牛血清白蛋白。

9.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的EDTA的浓度为10～100mmol/L。

10.根据权利要求1～9任一权利要求所述的试剂盒的制备方法和使用方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)试剂R1的制备：

在缓冲液1中加入稳定剂1、增凝剂、防腐剂1、保护剂1和EDTA，搅拌混合均匀，即得试剂R1；

(2)试剂R2的制备：

步骤一：将胱抑素C抗体进行4℃透析，再用缓冲液2将胱抑素C抗体稀释至2mg/ml，得到胱抑素C抗体稀释液；将聚苯乙烯胶乳微球用蒸馏水离心、洗涤3次；

步骤二：用缓冲液2将经过步骤一洗涤后的聚苯乙烯胶乳微球稀释到质量浓度为1％，再加入质量浓度为0.01％-0.1％的EDC，在室温下搅拌反应30min，反应结束后15000rpm离心洗涤以除去未反应的EDC，然后加入步骤一得到的胱抑素C抗体稀释液，室温下搅拌反应30min，再加入终止液终止反应，将得到的反应液15000rpm离心，用缓冲液2洗涤沉淀，重复离心洗涤3次，最后加入缓冲液2、防腐剂2、稳定剂2、保护剂2搅拌混合均匀即得试剂R2。