[发明专利]一种高灵敏度胶乳增强免疫比浊法试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂领域，特别是涉及一种高灵敏度胶乳增强免疫比浊法试剂盒。

背景技术

当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。这一方法早于1959年Schultre和Schuick等报道应用于血浆蛋白与其抗体结合后形成复合物，导致浊度的改变，再进行透射比浊测定，一般采用抗体对抗原定量的透射比浊法，称为免疫透射比浊法。其原理是，利用抗原和抗体的特异性结合形成复合物，通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法。

但是经典的免疫比浊法，少量的小的抗原抗体复合物极难形成浊度，除非放置较长时间；如形成较大的复合物，则抗原和抗体用量也较大，显然不符合微量化的要求。于是发展了现在广泛应用于生化分析仪的胶乳增强免疫比浊法(PETIA)：以多克隆抗体为基础的改良免疫比浊分析法，利用基因工程方法将抗体与胶乳颗粒结合，当抗原抗体相结合时便形成了抗原-抗体-胶乳颗粒复合物，增强了反应吸光度，反应液在一定波长处比浊，与同样处理的标准液比较，计算标本中抗原的含量。利用生化分析仪进行比浊测定，整个分析过程只需几分钟，该方法与传统免疫比浊法比较其灵敏度更高。

随着检验医学的发展，对于低浓度检测物质的检测越来越多，检测物质的浓度正在从μg/mL级别下降至ng/mL级别，对于诊断试剂的灵敏度要求也越来越高，对于传统的胶乳增强免疫比浊法来说需要进一步的提升检测的灵敏度，以适应检测要求，传统的提升检测灵敏度的方法包括采用亲和力更高的抗体，采用更大颗粒，稳定性更好的胶乳颗粒，选用更好的促进抗原抗体反应的缓冲液体系等，但是这些都会增加试剂的成本，如何提升面对ng/mL级别被分析物的分析灵敏度和精密度，同时不增加成本一直是试剂开发的一大挑战。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于通过反应波长的选择，不仅检测乳抗体抗原复合物的生成，还检测未结合胶乳颗粒的减少，提高检测物质的分析灵敏度和精密度，用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种提升胶乳增强免疫比浊法灵敏度的方法，包括如下步骤：

1.选用大粒径的胶乳颗粒与抗体反应，进行抗体包被，大粒径的胶乳颗粒的粒径为0.2-1.0μm；

2.将包被后的胶乳经过清洗和封闭步骤后，分散于缓冲液中，制得胶乳增强免疫比浊法试剂盒试剂2；

3.配置有促进抗原和抗体反应作用的缓冲液，制得胶乳增强免疫比浊法试剂盒试剂1；

4.在全自动生化分析仪上，设置参数，其中，主波长设置为300-500nm，副波长设置为500-800nm，反应方向为负方向；

5.运行生化仪，在使用已知浓度的样品进行定标后，检测待测样本得到吸光度变化值，根据校准曲线，计算出样本中待测物的含量。

优选的，所述步骤3中，缓冲液为Tris-HCl缓冲液，其配方为：Tris 50mmol/L，牛血清白蛋白BSA的浓度为3g/L，叠氮钠的浓度为1g/L，PEG6000的浓度为50g/L，水苏糖0.8-3g/L；明矾0.1-1g/L；果糖二磷酸钠0.8-3g/L；六偏磷酸钠0.05-0.5g/L，pH＝7.0-7.4。

优选的，所述提升胶乳增强免疫比浊法灵敏度的方法不是以疾病的诊断和治疗为目的的。

更优选的，对待测物含量的测量的直接目的不是获得诊断结果或健康状况，而只是从人体或动物体获取作为中间结果的信息的方法，或只是对已脱离人体或动物体的组织、体液或排泄物进行处理或检测以获取作为中间结果的信息的方法。

本发明第二方面提供所述提升胶乳增强免疫比浊法灵敏度的方法在生物检测领域的用途。

本发明第三方面提供一种高灵敏度胶乳增强免疫比浊法试剂盒，包括试剂1和试剂2，所述试剂2为包被有抗体的胶乳颗粒分散液，所述胶乳颗粒的粒径为0.2-1.0μm，所述试剂1为促进抗原和抗体反应的缓冲液。

优选的，所述试剂1的配方为：Tris 50mmol/L，牛血清白蛋白BSA的浓度为3g/L，叠氮钠的浓度为1g/L，PEG6000的浓度为50g/L，水苏糖0.8-3g/L；明矾0.1-1g/L；果糖二磷酸钠0.8-3g/L；六偏磷酸钠0.05-0.5g/L。