[发明专利]浮游动物rrnL基因扩增引物及其筛选方法和应用及应用方法有效
| 申请号： | 201410736863.5 | 申请日： | 2014-12-05 |
| 公开（公告）号： | CN104404154B | 公开（公告）日： | 2018-01-09 |
| 发明（设计）人： | 张效伟;杨江华 | 申请（专利权）人： | 南京大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11;G06F19/22 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所32207 | 代理人： | 蒋海军 |
| 地址： | 210023 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 浮游动物 rrnl 基因 扩增 引物 及其 筛选 方法 应用 | ||
1.浮游动物rrnL基因扩增引物，其特征在于：包括5条上游引物和4条下游引物，所述的5条上游引物分别为ZoorrnL_80F1：GACTGTGCTAAGGTAGCATAAT、ZoorrnL_80F2：GACTGTGCTAAGGTAGCGTGAT、ZoorrnL_200F1：GACGATAAGACCCTATGAAGCT、ZoorrnL_200F2：GACGATCAGACCCTTTGGAGCT、ZoorrnL_200F3：GACGAGAAGACCCCA TAAAACT；所述的4条下游引物分别为ZoorrnL_320R1：GCTGTTATCCCTAGGG TAACTT、ZoorrnL_320R2：CCTGTTATCCCCAAAGTAGCTT、ZoorrnL_400R1：TAATCCAACATCGAG GTCGCA、ZoorrnL_400R2：TAATCCAACATCGAGGT AGTA。
2.权利要求1所述的浮游动物rrnL基因扩增引物的应用方法，其步骤为：
(1)将权利要求1中所述的上游引物ZoorrnL_80F1和ZoorrnL_80F2按照摩尔比2:1的比例混合为ZoorrnL_80F，上游引物ZoorrnL_200F1、ZoorrnL_200F2和ZoorrnL_200F3按照等摩尔混合为ZoorrnL_200F，下游引物ZoorrnL_320R1和ZoorrnL_320R2按照摩尔比2:1的比例混合为ZoorrnL_320R，ZoorrnL_400R1和ZoorrnL_400R2按照摩尔比2:1的比例混合为ZoorrnL_400R；
(2)将步骤(1)中得到的ZoorrnL_80F、ZoorrnL_200F、ZoorrnL_320R和ZoorrnL_400R分别置于55℃条件下PCR反应退火；
(3)将步骤(2)中ZoorrnL_80F、ZoorrnL_200F、ZoorrnL_320R和ZoorrnL_400R两两组合进行PCR扩增得到长度为190bp至390bp的PCR产物；
(4)将步骤(3)中得到的PCR产物进行高通量测序，依据序列差异进行物种鉴定和生物多样性分析。
3.根据权利要求2所述的浮游动物rrnL基因扩增引物的应用方法，其特征在于：所述的步骤(3)中PCR扩增时采用的是Touchdown反应程序。
4.权利要求1所述的浮游动物rrnL基因扩增引物在浮游动物物种鉴定和生物多样性分析中的应用。
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