[发明专利]一种胎儿纤维连接蛋白检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种胎儿纤维连接蛋白检测试剂盒及其制备方法和用途。

背景技术

胎儿纤维连接蛋白(fetal Fibroneetin，fFN)是一种糖蛋白，分子量约500KD，有20种不同的分子形式。胎儿纤维连接蛋白(fFN)为子宫绒毛膜细胞外的基质成分，主要由滋养层细胞产生，存在于绒毛膜与蜕膜之间，为一种对绒毛膜和蜕膜起连接和黏附作用的糖蛋白，可于孕产妇的阴道后穹窿部位的分泌物中检出。国内外均对fFN指标的临床应用及临床意义进行了大量的研究，fFN相关同行评议文章超过300篇。一般认为fFN浓度与早产及分娩相关性较强，检测时间段为孕22-35周(早产)或孕足月(分娩)。因此，在孕22-35周之间，宫颈阴道分泌物中fFN的水平与是否发生早产有很好的相关性，fFN检测可作为预测早产的一个重要客观指标。

胎儿纤维连接蛋白(fFN)检测是美国FDA批准，用于有早产症状的孕妇和有高危因素孕妇的早产风险性评估，用于22-30孕周无症状孕妇的常规筛查和24-35孕周有早产症状孕妇检查。fFN检测是美国妇产科医师协会(ACOG)推荐的常规用于早产诊断的项目。

目前已知的胎儿纤维连接蛋白(fFN)检测方法还存在较多缺陷，如操作较为繁琐，耗时较长，不适宜临床上使用。前我国市场上的胎儿纤维连接蛋白(fFN)检测试剂盒准确度、灵敏度、重复性仍然较差。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种快速测定胎儿纤维连接蛋白fFN含量的试剂盒，用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种快速测定胎儿纤维连接蛋白fFN含量的试剂盒，包括试纸卡，所述试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含胎儿纤维连接蛋白fFN单克隆抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫上的胎儿纤维连接蛋白fFN单克隆抗体采用荧光微球标记。

优选的，所述金标垫上的胎儿纤维连接蛋白fFN单克隆抗体采用180nm荧光微球标记，EX(nm)＝650/Em(nm)＝670，具有信号受背景干扰小，检测灵敏度高，结果重复性好的优点。

优选的，所述底板为PVC底板。

优选的，所述硝酸纤维素膜上，检测线位于离加样端较近一侧，质控线位于离加样端较远一侧。

优选的，所述检测线上包被有胎儿纤维连接蛋白fFN单克隆抗体。所述金标垫上的胎儿纤维连接蛋白FFN单克隆抗体与检测线上的胎儿纤维连接蛋白fFN单克隆抗体可以是相同的抗体，也可以是不同的抗体。

优选的，质控线上包被羊抗鼠抗体。

优选的，所述样品垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为20-200mM。

优选的，本发明所述的金标垫还经过预处理，预处理时所使用的预处理缓冲液选自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为5-50mM。

优选的，所述缓冲液还包括反应增强剂，所述反应增强剂选自PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG20000中的任意一种，所述反应增强剂的浓度为10～50g/L。

优选的，所述缓冲溶液还包括表面活性剂，所述表面活性剂选自S-19 TWEEN 20、S-20 TWEEN 80、S-13 TRITON X-45、S-14 TRITON X-100、S-15 TRITON X305中的任意一种或多种的组合，所述表面活性剂的浓度为10～50g/L。

优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，本发明所述的金标垫在预处理时所使用的预处理缓冲液包括下列组分：水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠和甘氨酸，且水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠、甘氨酸的总浓度为3.5－7.5g/L，缓冲液的pH值为7.2－7.6。

优选的，各组分在缓冲液中的浓度为：

所述预处理缓冲液的溶剂为水。

所述预处理的具体步骤为：将金标垫在预处理液中浸泡1.5～2h，取出放于36～38℃烘干。

所述预处理缓冲液可使用本领域各种常用的pH调节剂进行pH值的调节。