[发明专利]一种高灵敏度的检测5’-核苷酸酶的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及外诊断试剂领域，特别是涉及一种高灵敏度的检测5’-核苷酸酶的试剂盒。

背景技术

5’-核苷酸酶(5’-Nucleotidase,5’-NT)广泛分布肝、胆、胰、肠、心、脑、肺、肾、垂体、甲状腺、前列腺等脏器和组织中，定位在细胞膜上，在肝内主要存在于胆小管和窦状间隙。是一种催化核苷-5’-单磷酸水解生成核苷和无机磷酸盐的酶。人血清5’-核苷酸酶均来自胞膜，为胞外5’-核苷酸酶，其活性水平为3～12μmol/L磷酸。5’-核苷酸酶作为一种糖蛋白。由两个分子量为70000的亚基组成，是含一个疏水区结构的二聚体。体内通过糖基-磷脂酰肌醇(GPI)锚定于细胞膜外表面，它是细胞膜上二聚体解聚后形成的寡聚体，由细胞膜上脱落并经代谢而产生广泛表达于人体组织细胞表面，包括肝细胞、成纤维细胞、内皮细胞、淋巴细胞和神经胶质细胞、近端肾小管上皮细胞等，最适pH为6.6～7.0，受Mg²⁺或Mn²⁺激活，为Ni²⁺所抑制。

5'-核苷酸酶(5'-Nucleotidase，5'-NT)测定主要用于肝胆系统疾病的诊断和骨骼疾病的鉴别诊断。血清5'-NT活性升高主要见于肝胆系统疾病，如阻塞性黄疸、肝癌、肝炎等，其活性增高可达2～6倍，且与病情严重程度呈正相关，且其活性变化与ALP一致。但骨骼系+统疾病，如肿瘤转移、畸形性骨炎、佝偻病、甲状旁腺功能亢进等，通常ALP活性升高，而5'-NT正常。因此ALP和5'-NT同时测定有助于肝胆和骨骼系统疾病的鉴别诊断。

同时，在肝癌患者的多次生化检测中发现，在病变早期许多生化指标升高不显著时，5'-NT的活性便有所升高，这表明在诊断肝肿瘤时5'-NT是一个灵敏指标。另外，5’-NT活性变化与肺癌肿瘤细胞生长、发展和转移密切相关，是肺癌核苷酸代谢中重要的转化相关酶，监测其改变既可作为肿瘤恶变和衡量分化程度的指标，又是肿瘤生长的分子基础，因此对发现肺癌有一定的辅助诊断作用；在检测冠状动脉病变疾病时，血清5’-核苷酸酶升高可能在冠心病发生发展中起到一定的保护作用，对此进行干预，从而对心血管事件的发生起到预防作用；5'-NT还在白血病、乳癌的检测中具有重要作用。

目前，临床上对5’-NT的测定方法多采用第五代“PNP-XOD-POD”酶法，该方法简便快捷、结果相对可靠，对肝胆疾患的诊断具有较高应用价值。但该方法在测定过程中，需要PO^3-和Mg²⁺(或Mn²⁺)的共同参与，由于目前许多试剂盒未能很好地解决PO^3-和Mg²⁺(或Mn²⁺)生成沉淀的问题，使得测定试剂的PO^3-和Mg²⁺(或Mn²⁺)的浓度低于反应所需的最适浓度，以及存在ALP对5’-IMP的干扰不能完全消除的现状，从而造成测定灵敏度低，重复性不佳，给临床进一步推广应用次方法带来困难。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种稳定性好、测试结果准确、灵敏度高、抗干扰能力强、重复性好，能真实反映5’-核苷酸酶的活性并能用于半自动、全自动生化分析仪的均相测定的新方法及检测试剂盒，用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种高灵敏度的检测5’-核苷酸酶的试剂盒，包括5’-核苷酸酶R1试剂、5’-核苷酸酶R2试剂和5’-核苷酸酶校准品；所述5’-核苷酸酶R1试剂由缓冲液、稳定剂、防腐剂、酶激活剂、4-AAP(4-氨基安替吡啉)、18-冠醚-6、UAO(尿酸酶)、PNP(嘌呤核苷磷酸化酶)、XOD(黄嘌呤氧化酶)和POD(过氧化物酶)反应酶系统组成；所述5’-核苷酸酶R2试剂由缓冲液、稳定剂、防腐剂、PO^3-和Trinder显色系统组成；所述5’-核苷酸酶校准品由缓冲液、稳定剂、防腐剂和5’-核苷酸酶组成。