[发明专利]含CD54表达之报告系统之免疫细胞的应用以及经克隆之新颖细胞

说明书

本发明提供一种确认免疫调节物质的方法，包括：(a)提供待测物与免疫细胞，其中该免疫细胞包括CD54表达之报告系统，而该CD54表达之报告系统，包括：CD54基因之启动子；以及报告基因，与该CD54基因之启动子连接，用以报告该CD54基因之启动子的表达；(b)以该待测物处理该免疫细胞；以及(c)测定经该待测物处理之该免疫细胞所产生之该报告基因的产物表达以判定该待测物是否有免疫调节作用。

发明领域

本发明关于含CD54表达之报告系统之免疫细胞的应用，且特别关于将此含CD54表达之报告系统之免疫细胞应用于确认免疫调节物质的方法。

发明背景

CD54(分化簇54(Cluster of Difffeentiation 54))(也已知为细胞间黏附分子-1(Intercellular Adhesion Molecule 1，ICAM-1)，其为于人类体中由ICAM1基因所编码出之蛋白质。此基因编码出通常表达于内皮细胞(endothelial cells)与免疫系统之细胞上的细胞表面糖蛋白(glycoprotein)。CD54与CD11a/CD18型(type)，或CD11b/CD18型之整联蛋白(integrins)结合，且也被鼻病毒(rhinovirus)利用为一受体(receptor)。目前已知CD54为免疫反应，特别是过敏反应的一生物标记。

免疫反应在许多疾病皆扮演重要的角色，例如发炎反应，皮肤敏感性等等，因此许多药物皆针对调节免疫系统进行开发。但是免疫系统所涉及的生物分子及细胞种类繁多，因此常需要以活体动物实验以进行实验评估，而造成时间及成本增加。虽然目前已有许多的细胞实验模型可以进行调节免疫反应的测试，然而，其在分析上常需要以ELISA或流式细胞仪来进行实验，也较平常生物实验复杂。

又，致敏性是化妆品、各种化学品、农产品、环境毒物、工业制品等产品上市前的重要安全性评估项目。顺应动物实验伦理及减量的趋势，欧美日各国的研究机构和相关企业公司均投入相当大的资源于替代性动物实验方法的开发，但目前在国际上仍未出现公认可以取代动物实验的替代方式。

因此，目前亟需发展不须动物实验之确认免疫调节物质或致敏物质的新方法以适合高通量测试使用。

发明内容

本发明提供一种确认免疫调节物质的方法，包括：(a)提供待测物与免疫细胞，其中该免疫细胞包括CD54表达之报告系统，而该CD54表达之报告系统，包括：CD54基因之启动子；以及报告基因，与该CD54基因之启动子连接，用以报告该CD54基因之启动子的表达；(b)以该待测物处理该免疫细胞；以及(c)测定经该待测物处理之该免疫细胞所产生之该报告基因的产物表达以判定该待测物是否有免疫调节作用。

本发明也提供一种确认皮肤致敏物质的方法，包括：(a)提供待测物与免疫细胞，其中该免疫细胞包括CD54表达之报告系统，而该CD54表达之报告系统，包括：CD54基因之启动子；以及报告基因，与该CD54基因之启动子连接，用以报告该CD54基因之启动子的表达；(b)以该待测物处理该免疫细胞；以及(c)测定经该待测物处理之该免疫细胞所产生之该报告基因的产物表达以判定该待测物是否为皮肤致敏物质。

本发明更提供一种经克隆之新颖细胞，其系于2014年11月12日保藏于德国微生物和细胞培养物保藏中心，保藏编号为DSM ACC3257。

因此本发明提供了不须动物实验之确认免疫调节物质或皮肤致敏物质的新方法以适合高通量测试使用，开发出替代动物实验的方法，符合相关动物实验伦理及减量的趋势。

附图说明

图1显示本发明一实施例之CD54-启动子mLuc表达系统。

图2显示本发明一实施例之判定待测物质是否为皮肤致敏物的流程。以及

图3显示本发明一实施例之判定待测物质是否为抗发炎物质的流程。

发明详述