[发明专利]可用于诊断人肠道病毒71型感染的试剂盒及诊断方法

说明书

技术领域

本发明主要涉及诊断试剂盒及诊断方法。具体而言，本发明涉及可用于诊断人肠道病毒71型感染的试剂盒及诊断方法。

背景技术

肠道病毒EV71型感染是由人肠道病毒71型(EV71)引起的疾病的总称，临床上主要表现为手足口病，手足口病多在婴幼儿中爆发流行，部分EV71感染患儿表现为疱疹性咽峡炎，重症患者出现病毒性脑炎、病毒性脑脊髓膜炎、肺水肿、肺出血等。引起手足口病的病原，最常见的是柯萨奇病毒A16和肠道病毒71型；由肠道病毒71型感染引起的疾病发生重症感染的比例较大，病死率也较高，重症病例病死率可达10％-25％，因此病原学诊断意义重大。

肠道病毒71型(EV71)基因组为含有大约7.5Kb的单股正链RNA，包括5'端非编码区、3'端非编码区和由Pl，P2，P3所组成的多蛋白，共编码11种蛋白，其中4个结构蛋白VPl,VP2,VP3,VP4,7个非结构蛋白2A，2B，2C，3A，3B，3C，3D。其中VP1,VP2,VP3暴露于病毒外壳的表面，为EV71主要的抗原变异位置；VP4包埋在病毒外壳的内侧与内部的RNA结合，其功能类似病毒外壳的锚，用以稳定病毒蛋白的结构。非结构蛋白2A为分裂初期先驱蛋白质，也与终止宿主细胞合成其本身所需蛋白有关；3C则参与大部分的蛋白裂解反应；3D为RNA聚合酶，在病毒RNA复制时主导转录及复制反应；2B,2C,3A,3B等四种蛋白则与病毒RNA的复制有关。

肠道病毒EV71的临床诊断主要依据三个方面:一是临床表现，二是血清学证据，三是病原学证据。由于肠道病毒EV71型感染临床表现多，因此肠道病毒EV71的血清学检测和病原学检测是目前最主要的依据。EV71感染产生免疫保护，感染后可检出IgM和IgG抗体。

肠道病毒71型抗体(IgM)的检测已有相关文献报道，基本上是以肠道病毒71型的病毒培养物作为包被抗原的间接ELISA，试剂盒在特异性、灵敏度和稳定性方面尚存诸多不足之处；并且，由于病毒培养成本高，效率低，无法大量供应市场。中国发明专利CN102243232A，公开日2011年11月16公开了一种肠道病毒71型抗体(IgM)的酶联免疫测定试剂盒(酶联免疫法)，技术方案是首先将血清加入到微孔板中，其中的IgM抗体被预包被在微孔板上的抗μ链捕获，然后，加入酶标记物，被捕获的IgM中的EV71-IgM会与HRP标记的EV71重组抗原特异性结合，洗涤后，HRP会和后续加入的底物反应，最终达到检测EV71-IgM抗体的目的，但是这种方法所需(如血清的体积)大、消耗的试剂等耗材量也大，且该方法仅限用于IgM检测，对检测病人体内IgG则不理想。

发明内容

本发明的目的在于提供新的可用于诊断人肠道病毒71型感染的试剂盒及诊断方法。

本发明人令人惊奇地发现，当以SEQ ID NO：1所示的多肽和SEQ ID NO：2所示的多肽对受试者来源的血液样本中的IgM有响应、和/或SEQ ID NO：1所示的多肽对受试者来源的血液样本中的IgG有响应作为判定受试者是否已被人肠道病毒71型感染的指标的情况下，可以以90％以上的灵敏度诊断人肠道病毒71型感染，这是目前我们知道的任何仅使用2个以下的诊断分子的诊断试剂盒均未达到的高灵敏度。

因此，本发明包括：

1.一种诊断试剂盒，其包括一个或多个固体载体，所述固体载体包括彼此分离的I区和II区；

所述I区包括独立地连接于所述固体载体上的多肽集合I，所述多肽集合1包含独立的下述多肽：

SEQ ID NO：1所示的多肽；和

SEQ ID NO：2所示的多肽；

所述II区包括独立地连接于所述固体载体上的多肽集合II，所述多肽集合II包含独立的SEQ ID NO：1所示的多肽。

2.根据项1所述的试剂盒，其中，所述多肽集合I中的全部多肽独立地连接于同一固体载体上。

3.根据项1所述的试剂盒，其中，所述多肽集合II中的全部多肽独立地连接于同一固体载体上。

4.根据项1所述的试剂盒，其中，所述I区和II区位于不同固体载体上。

5.根据项1所述的试剂盒，其用于诊断人肠道病毒71型感染。

6.根据项1所述的试剂盒，其中，所述多肽集合I还包含独立的下述多肽：

SEQ ID NO：3所示的多肽。

7.根据项1所述的试剂盒，其中，所述多肽集合II还包含独立的下述多肽：

SEQ ID NO：3所示的多肽；和/或

SEQ ID NO：4所示的多肽；和/或