[发明专利]一种贝母素甲的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种贝母素甲的制备方法，属于中药化学或天然药物制备领域。

背景技术

百合科贝母属植物全球约有130种，广泛分布于北半球的亚、欧及北美洲的温带地区，我国有43种，19变种，主要分布于安徽、浙江、四川、新疆、甘肃、湖北、东北三省等，分为浙贝母、湖北贝母、平贝母、伊贝母和川贝母等多种药物品种，均含有贝母素甲，药物来源十分广泛。

贝母素甲(verticine,peimine)为2010年版《中国药典》中浙贝母的质量控制成分，是一种甾体生物碱，分子式C₂₇H₄₅NO₃，结构式为：

贝母素甲是贝母平喘的主要药效成分之一，近年来研究表明，贝母素甲通过抑制细菌细胞膜上的主动外排泵来发挥作用，对耐药金黄色葡萄球菌具有较强的逆转作用；另外贝母甲素具有抑制肿瘤细胞增殖、转移，抑制甲状腺相关眼病患者眼眶成纤维细胞增殖等作用。

现有制备方法主要是柱层析技术和高速逆流色谱技术。其中：

柱层析技术(翟爱华，王丽杰，张东杰等.利用硅胶柱层析分离纯化平贝总碱的研究[J].食品科学，2009，30(1)：119-121.)是一种传统的天然产物提取方法，该法是指将贝母总碱与硅胶混匀，用干法装柱，上样，乙酸乙酯-甲醇-氨水为展开剂进行洗脱，合并相同流分，真空浓缩至干，80％甲醇回流2次，4～6℃放置，析出贝母素甲。该方法操作过程繁琐，同时需要消耗大量乙酸乙酯、甲醇、氨水等有毒、有刺激性气味且价格昂贵的溶剂，该方法规模较小，仅适合实验室中操作。

高速逆流色谱技术(CN 100526329C)，该法是指以浙贝母粗提物为进样物，以氯代烷烃、脂肪醇或脂肪酮、烯酸溶剂组成溶剂系统，经高速逆流色谱制备，所得馏分蒸干后，用氯仿溶解，水洗3次制得贝母素甲。该方法需要用到氯仿或四氯甲烷等有毒且价格昂贵的溶剂，该方法受仪器限制，每次进样量有限，规模较小，仅适合实验室中操作。

以上方法的产品收率较低，不但需要甲醇、氯仿等毒性试剂，而且有的生产成本较高，很难大规模工业化生产，仅适用于小规模的纯化，不能满足市场需求。

发明内容

本发明的目的是提供一种贝母素甲的制备方法，该方法操作简便、无需使用甲醇、氯仿等毒性溶剂，分离量大，工艺简单、可以工业化大量生产，综合成本低。

本发明提供的贝母素甲的制备方法，包括如下步骤：

(1)提取：用盐酸水溶液渗漉提取或用乙醇回流提取贝母，得提取液；

(2)利用大孔吸附树脂对所述提取液进行分离纯化：依次用水、乙醇水溶液Ⅰ和乙醇水溶液Ⅱ进行洗脱，并收集所述乙醇水溶液Ⅱ的洗脱液，经浓缩得浓缩物；

所述乙醇水溶液Ⅰ是由乙醇和水组成，所述乙醇水溶液Ⅰ中乙醇的体积浓度为10％～50％；

所述乙醇水溶液Ⅱ是由乙醇和水组成，所述乙醇水溶液Ⅱ中乙醇的体积浓度为30％～80％；

(3)利用中性氧化铝柱对所述浓缩物进行纯化：用体积浓度为95％的乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液即得所述贝母素甲。

上述制备方法中，所述贝母可为浙贝母、皖贝母或平贝母，具体可为浙贝母、皖贝母或平贝母的鳞茎。

上述制备方法，步骤(1)中，所述提取之前还包括将所述贝母进行干燥和粉碎的步骤；

所述干燥的温度为40～60℃，具体可为60℃；干燥时间为1～72小时，具体可为24小时；

所述粉碎中所用筛网的目数为10～40目，具体可为20目。

上述制备方法，步骤(1)中，所述渗漉提取为将所述贝母与所述盐酸水溶液先混合浸泡，浸泡时间小于等于48小时，具体可浸泡24小时；再用所述盐酸水溶液渗漉，渗漉时间小于等于72小时，可以0.1mL～10mL/(kg·min)的速度进行渗漉，具体可以3mL/(kg·min)的速度进行渗漉，渗漉至无生物碱反应，收集渗漉液即得所述提取液；

所述浸泡和所述渗漉中，每1kg所述贝母需要3～30L所述盐酸水溶液，其中浸泡时，每1kg所述贝母具体需要3L～10L所述盐酸水溶液，具体可为6L；渗漉时，每1kg所述贝母具体需要5L～30L所述盐酸水溶液，具体可为20L；

所述盐酸水溶液的摩尔浓度为0.01mol/L～0.5mol/L，具体可为0.1mol/L～0.2mol/L、0.1mol/L或0.2mol/L。