[发明专利]一种微生物菌株及其在降解烟草甾醇中的应用

权利要求书

1.一种甾醇降解菌株（Acinetobacter pittii）TCD0002，已于2014年10月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No. 9752。

2.权利要求1所述的甾醇降解菌株（Acinetobacter pittii）TCD0002在降解甾醇中的应用。

3.根据权利要求2所述的甾醇降解菌株（Acinetobacter pittii）TCD0002在降解甾醇中的应用，其特征在于所述的甾醇为烟叶及其衍生产品中的甾醇。

4.根据权利要求3所述的甾醇降解菌株（Acinetobacter pittii）TCD0002在降解甾醇中的应用，其特征在于包括如下步骤：

步骤（1），斜面培养：将甾醇降解菌株TCD0002于斜面培养基上培养，培养温度为28℃，培养时间为7d；然后用无菌水将斜面表面生长的菌苔用接种环刮洗，制备成第一菌悬液；

步骤（2），扩繁培养：将步骤（1）得到的第一菌悬液接种至扩繁培养基上进行扩繁培养，接种量为5%，培养温度为28℃，培养时间为7d；

步骤（3），降解应用：将步骤（2）培养的甾醇降解菌株TCD0002制成第二菌悬液，然后喷洒到烟叶及其衍生产品中进行降解。

5.根据权利要求4所述的甾醇降解菌株（Acinetobacter pittii）TCD0002在降解甾醇中的应用，其特征在于步骤（1）所述的斜面培养基为：NaCl 1.5g，K₂HPO₄ 1.5 g，NaNO₃ 4.5g，FeSO₄·H₂O 0.0075g，MgSO₄ 0.3g和1.0g/L豆甾醇乳浊液150 mL，琼脂30g，一起加入至自来水中定容成1.5L，调整pH=7.0，加热煮沸，待琼脂融化后，分装至带棉塞10mL玻璃试管内，每管分装量为4mL，接着121℃灭菌30分钟，然后放置成斜面，冷却至室温，即得。

6.根据权利要求4所述的甾醇降解菌株（Acinetobacter pittii）TCD0002在降解甾醇中的应用，其特征在于步骤（1）所述的第一菌悬液浓度为10⁹CFU/mL。

7.根据权利要求4所述的甾醇降解菌株（Acinetobacter pittii）TCD0002在降解甾醇中的应用，其特征在于步骤（2）所述的扩繁培养基为：NaCl 1.5g，K₂HPO₄ 1.5 g，NaNO₃ 4.5g，FeSO₄·H₂O 0.0075g，MgSO₄ 0.3g，1.0g/L豆甾醇乳浊液150 mL和琼脂30g，一起加入至自来水中定容成1.5L ，调整pH=7.0，加热煮沸，待琼脂融化后，分装至带棉塞500mL三角瓶，每瓶分装量为100mL，接着121℃灭菌30分钟，冷却至室温，即得。

8.根据权利要求4所述的甾醇降解菌株（Acinetobacter pittii）TCD0002在降解甾醇中的应用，其特征在于步骤（3）所述的第二菌悬液浓度为10⁹CFU/mL。

9.根据权利要求8所述的甾醇降解菌株（Acinetobacter pittii）TCD0002在降解甾醇中的应用，其特征在于步骤（3）所述的降解应用是将每50mL菌悬液喷洒至1000g烟丝上，然后将其放置于恒温恒湿培养箱内，于温度为28℃，湿度为60%培养48小时后，50℃烘干20分钟，即可。

10.根据权利要求8所述的甾醇降解菌株（Acinetobacter pittii）TCD0002在降解甾醇中的应用，其特征在于步骤（3）所述的降解应用是每1mL菌悬液接种100mL烟浸膏稀释液，然后放置于恒温摇床，于28℃下180rpm培养48小时，减压浓缩，50℃烘干，即可；所述的烟浸膏稀释液是将烟浸膏用自来水稀释5倍得到的。