[发明专利]一种FRAX综合症相关基因FMR1检测试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明属于疾病相关基因突变检测技术领域，具体涉及FRA X综合症相关基因FMR1突变检测试剂盒及其应用。

背景技术

脆性X染色体（Fragile X, Fra X）综合征导致患者智障（Martin-Bell综合征）。本病在男性中的发病率为1/1000~1/1500，仅次于先天愚型。脆性X综合症是由于在人体内X染色体的形成过程中的突变所导致。主要表现为中度到重度的智力低下，其它常见的特征尚有身长和体重超过正常儿，发育快，前额突出，面中部发育不全，下颌大而前突，大耳，高腭弓，唇厚，下唇突出，另一个重要的表现是大睾丸症。一些患者还有多动症，攻击性行为或孤癖症，中、重度智力低下，语言行为障碍。20%患者有癫痫发作。过去曾认为由于女性有两条X染色体，因此女性携带者不会发病，但由于两条X染色体中有一条失活，女性杂合子中约1/3可有轻度智力低下。目前依然缺乏有效的治疗方法，对社会和家庭造成巨大影响。早期诊断有望获得较为主动地医学机会。

现今在X脆性部位已发现了致病基因FMR-1，它含有（CGG）n 三核甘酸重复序列，后者在正常人约为30拷贝，而在正常男性传递者和女性携带者增多到150~500bp，称为小插入，与之相邻的CpG岛未被甲基化，称为前突变（premutation），携带者无或只有轻微症状。女性携带者的CGG区不稳定，在向受累后代传递过程中扩增，以致在男性患者和脆性部位高表达的女性达到1000~3000bp，相邻的CpG岛也被甲基化。这种全突变（full mutation）可关闭相邻基因的表达，从而出现临床症状。由前突变转化为完全突变只发生母亲向后代传递过程中。根据对脆性部位DNA序列的了解，现已可用细胞遗传学检测、RFLP连锁分析、DNA杂交分析、PCR扩增等方法来检出致病基因。但是现行的细胞遗传学检测、RFLP连锁分析、DNA杂交分析方法时间长，对样本需求量大，技术操作复杂，难于广泛开展。而基于PCR扩增和毛细管电泳和测序分析则因为（CGG）n的扩增难度成功率不高因而开展有限。因此，需要提供一种可靠的、方便的FRA X综合症相关基因FMR1突变检测方法。

发明内容

本发明的目的就是针对以上存在的问题与不足，提供一种FRA X综合症相关基因FMR1突变检测试剂盒及其应用。

本发明首先提供FRAX相关基因FMR1突变检测探针组合物，其包括第一PCR引物对、第二PCR引物对、第三PCR引物对和第四PCR引物对；其中，所述第一PCR引物对是SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，所述第二PCR引物对是SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:3所示的核苷酸序列，所述第三PCR引物对的核苷酸序列是SEQ ID NO:1和SEQ ID：4以及竞争性引物SEQ ID NO:6；所述第四PCR引物对的核苷酸序列是SEQ ID NO:1和SEQ ID：5以及竞争性引物SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列。

本发明提供的FRAX相关基因FMR1突变检测试剂盒，包含有上述FRAX相关基因FMR1突变检测探针组合物。具体地，包括第一对引物容器、第二引物容器、第三对引物容器和第四引物容器；所述第一引物容器内具有第一PCR引物对（SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2）干燥粉末或溶液；所述第二引物容器内具有第二PCR引物对（SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:3）干燥粉末或溶液；所述第三引物容器内具有第三PCR引物组（SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO：6）干燥粉末或溶液，所述第四引物容器内具有第四组PCR引物（SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO：6）干燥粉末或溶液。

本发明提供的FRAX相关基因FMR1突变检测试剂盒在检测FRAX相关基因FMR1突变中的应用，即用于FRAX相关基因FMR1突变检测，具体步骤为：

（1）提取检测对象的基因组DNA； 

（2）采用平行对照方法，取等量基因组DNA建立HpalI酶切和对照体系（即两管反应体系），HpalI酶可以切开非甲基化DNA；