[发明专利]一种猪传染性胸膜肺炎抗体检测用抗原及制备方法

权利要求书

1.一种猪传染性胸膜肺炎抗体检测用抗原，其特征在于，所述的抗原为猪传染性胸膜肺炎1～15型的混合抗原。

2.如权利要求1所述的抗原，其特征在于，所述的抗原为从猪胸膜肺炎放线杆菌1～15型菌株培养物中提取的多糖抗原。

3.权利要求1所述的抗原的制备方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：

1)生产抗原用种子制备

将APP1～15型冻干菌种分别划线接种于S琼脂平板上，置5％～10％CO₂条件下，37℃培养16～18小时，分别挑选菌落接种5～6日龄SPF鸡胚卵黄囊内，在37℃继续孵育，收集30小时内死亡的鸡胚卵黄液作为一级种子；再分别取各型菌株一级种子划线接种S琼脂平板，在含5％～10％CO₂条件下37℃培养16～18小时后，挑选菌落或菌苔接种于S肉汤培养基中，置37℃振荡培养10～12小时制成二级种子；

2)菌液的培养

将各型菌株的二级种子按3％接种到S肉汤中进行扩大培养，37℃振荡培养10～12小时，收获菌液；将各型菌液按终浓度为0.5％加入甲醛溶液，37℃振荡灭活24小时，灭活，将菌液5000r/min离心20min去上清，将沉淀的菌体用pH6.4PBS洗涤2次，将沉淀的菌体用pH6.4PBS稀释，稀释后将各型菌液置于-20℃以下反复冻融3～5次，然后进行冰浴超声裂解，间歇破碎5min，以8000r/min离心30min，各型上清液分别用0.22μm滤膜无菌抽滤，收集于无菌瓶内，其滤液即为猪传染性胸膜肺炎1～15型单型诊断用抗原液；将APP1～15型标准浓度抗原等量混合完成制备。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的S琼脂，其制备方法如下：取鸡肉汁100ml,胰蛋白胨血琼脂基质3g，多聚蛋白胨0.5g，加热溶解后调pH值至7.2～7.4，115℃灭菌30分钟，待冷至55℃左右，加入灭活鸡血清5ml，1％辅酶Ⅰ1ml。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的S肉汤，其制备方法如下：取鸡肉汁100ml，多聚蛋白胨0.5g，胰蛋白胨0.5g，氯化钠0.5g，加热溶解后调pH值至7.2～7.4，115℃灭菌30分钟，待冷至55℃左右，加入灭活的鸡血清5ml，1％辅酶Ⅰ1ml。