[发明专利]一株饲用布拉氏酵母及其应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物领域，具体涉及一株饲用布拉氏酵母菌株及其应用。

背景技术

布拉氏酵母由印尼荔枝中发现并分离，后被确定为酿酒酵母的一个亚种。研究表明布拉氏酵母没有病原性，能在37℃高温下良好生长，并具有独特的生物活性。1962年起布拉氏酵母活菌制剂被应用于治疗人类腹泻，该酵母不仅可以降解致病菌产生的毒素和中和细菌毒素，还能够刺激肠道黏膜从而增强免疫功能，同时调节肠道内微生态环境的平衡，阻止病原菌的侵袭。

随着养殖业的迅速发展，饲用抗生素的限制使用，对绿色饲料添加剂的研究来保障动物生产安全系统变得尤为关键。布拉氏酵母由于其具有缓解腹泻症状的独特作用，1993开始作为微生物饲料添加剂用于改善单胃动物营养和健康，在动物养殖中亦显示良好的效果。另外该酵母本身还有丰富的蛋白质维生素各种营养成分和因子，为动物补充各种营养及生长因子，促进其健康生长，其发展前景十分广阔。

本发明从华中农业大学果园土壤中分离得到一株具有优良益生性能的布拉氏酵母SH94，建立了以麸皮为主要基质的高密度固体发酵工艺。动物饲喂试验表明，该菌剂能够提高饲料利用率，降低断奶仔猪腹泻率，具有工业化开发和推广应用的潜力。

发明内容

本发明的目的是提供一株饲用布拉氏酵母(Saccharomyces boulardii)，该菌株已于2014年05月19日送至于中国典型培养物保藏中心保藏，分类命名：布拉氏酵母(Saccharomyces boulardii)SH94，保藏号：CCTCC NO：M 2014211，地址：中国武汉武汉大学。

本发明还提供了一种高密度固体发酵生产布拉氏酵母SH94的方法，方法简单，易行。

本发明的另一个目的在于提供了布拉氏酵母(Saccharomyces boulardii)SH94在制备饲料添加剂中的应用。仔猪饲养实验结果显示布拉氏酵母能有效降低料肉比并显著降低腹泻率，促进仔猪生长。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

一株饲用布拉氏酵母(Saccharomyces boulardii)，通过以下方法筛选得到：

1)从华中农业大学果园根际采集根际土壤，将土样在含有50μg/mL/mL氨苄青霉素的胨葡萄糖(YPD)液体培养基中30℃好氧富集培养浑浊，适当稀释后涂平板，根据菌落形态挑取典型酵母菌单菌落(白色，大小1-2mm，湿润隆起，有酯香味)，通过镜检粗筛出酵母菌。

2)通过生理生化、26S rDNA测序及微卫星位点YLR177W特异序列分析，最终筛选到一株布拉氏酵母(Saccharomyces boulardii)SH94。该菌株已于2014年05月19日送至于中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号：CCTCC NO：M 2014211，地址：中国武汉武汉大学。

SH94菌株具体有典型的布拉氏酵母生理生化特征：该菌株在胨葡萄糖琼脂固体培养基(YPD)上繁殖形成的菌落圆形，大而湿润，呈乳白色，表面隆起，光滑无皱褶，边缘清晰，生长迅速；镜检显示细胞个体较大，呈近球形，多边芽殖，可产生子囊孢子。生理生化特征：发酵葡萄糖、半乳糖、麦芽糖、蔗糖，棉籽糖发酵1/3，不同化硝酸盐，不分解尿素，产酯，耐10％乙醇。

分子生物学鉴定结果显示布拉氏酵母SH94在微卫星位点YLR177W特异序列为：CTTAAACAACAGCTCCCAAAAATACTATCCACAGAAACAACAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAACAACAAAGCATCTTTGACCCGGGAAGAAGATCTTCCTATATTTCTGATGCGCTGATTCAT

微卫星位点YLR177W中的(CAG)9只会出现在布拉氏酵母中。上述序列大小为130bp，CAG的个数为9个，证明该酵母为布拉氏酵母。耐盐能力实验结果显示，布拉氏酵母SH94在NaCl质量分数为11％时生长状况良好，在NaCl质量分数为13％时还能生长，在NaCl质量分数为14％时不能生长。耐人工胃液和肠液能力实验结果显示布拉氏酵母SH94在pH2.0的人工合成胃液中处理2.5小时活菌数降低不到10％，接着在pH6.8的人工合成肠液中处理2.5小时活菌数无明显变化。耐热能力实验结果显示布拉氏酵母SH94在40℃水浴恒温处理6h，存活率可达到60％，在70℃水浴处理2min及在80℃水浴处理30s后，菌液的存活率可以维持在60％以上。

一种布拉氏酵母高密度固体发酵方法，其步骤如下：