[发明专利]一种ICSI操作皿制作方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种能在短时间内找并吸取精子的方法，具体涉及一种ICSI操作皿的制作方法。

背景技术

单精子卵胞浆内注射技术（ICSI）使得无数严重少精症、梗阻性无精症患者拥有了自己的后代，ICSI操作过程必须在ICSI操作皿上完成，传统ICSI操作皿由ICSI皿、PVP圆形微滴、PVP条形微滴和缓冲培养基微滴组成，过程是将含有精子的培养基吸取1.0μl左右加到PVP条形微滴中制动后，完成ICSI操作，但是遇到一些洗涤后精子密度极少的情况，使用此方法很难在短时间内找到精子，使ICSI操作时间大大延长，卵子长时间暴露在培养箱外部，不能保持恒定的温度、湿度和CO2浓度，难免会损伤卵子的超微结构，影响其受精和发育潜能，如果加入培养基的量过大，则精子总数增加，相对容易找到精子，但是会导致精子在PVP溶液中处于漂浮状态，穿刺针很难抓取和制动精子，同样会延长ICSI操作时间，而且培养基中的一些精子杂质会污染PVP溶液。

一些IVF实验室建议严重少精子症和梗阻性无精子患者多次取精后冷冻保存以增加精子总量，此方法弊端为：多次冻存精子会增加治疗成本，目前密度很低的精子其冷冻后复苏效果不理想，而且冷冻液对精子是否有损伤、冷冻过程中液氮是否会对精子产生污染、使用复苏的精子其安全性如何目前仍无定论。

发明内容

本发明的目的是为了解决已有ICSI操作皿存在的技术问题，本发明提供一种新的ICSI操作皿制作方法。

本发明的原理为：本方法做的精子培养基条形微滴为0.1ml左右，由于量大，培养基内的精子总数为传统方法的100倍左右，其传统方法量为1.0μl左右，培养基内质量好的精子会向条形微滴边缘移动，由于精子总量增加，发现并抓取精子时间大大缩短。

本发明提供的一种ICSI操作皿制作方法，步骤和条件如下：

步骤一：用吸管吸取PVP溶液，在ICSI皿上方做两个10μl圆形微滴；

步骤二：微滴正下方做长宽各为2.5 cm、0.5cm的条形PVP微滴；

步骤三：吸取含有精子沉淀的培养基0.09-0.2ml，在PVP条形微滴一侧做长为1.8-2.2cm，宽为0.4-0.6cm的条形微滴；

步骤四：吸取缓冲培养基在PVP条形微滴另一侧做3-5个10μl圆形微滴，微滴内放入卵子；

步骤五：吸取缓冲培养基在PVP条形微滴正下方做1个10μl圆形微滴，即洗针；

步骤六：用显微穿刺针从含有精子的培养基条形微滴内吸取1个精子，放入PVP条形微滴内，制动精子；

步骤七：用显微固定针固定住卵子，使其极体处于6点或12点位置；

步骤八：带有精子的显微穿刺针从3点位置将精子注射至卵子内，即完成ICSI操作皿制作。

采用上述技术方案的有益效果是：

本发明提供的一种新的单精子卵胞浆内注射操作皿制作方法，是一种简单、实用的制作方法，适用于严重少精症、附睾取精和睾丸取精等特殊精液的ICSI操作。能在短时间找到并内吸取质量较好的精子完成ICSI操作，减少卵子在培养箱外暴漏时间。最大限度的减少温度、湿度和CO2浓度的变化对卵子纺锤体等超微结构的损伤。

本发明最大限度的利用每一条精子，特别适合精子数量极少的情况。

本发明的方法适用于严重少精症、附睾取精和睾丸取精等ICSI的操作，大大缩短精子抓取和制动时间。

附图说明

图1为本发明ICSI操作皿制作方法的ICSI操作皿示意图。

图中：1-ICSI皿、2-缓冲培养基圆滴、3-PVP溶液条形滴、4-精子沉淀条形微滴、5-PVP溶液圆滴。

具体实施方式

下面对本发明作进一步详细说明：

一种ICSI操作皿制作方法，步骤和条件如下：

步骤一：用吸管吸取PVP溶液，在ICSI皿上方做两个10μl圆形微滴；

步骤二：微滴正下方做长宽各为2.5 cm、0.5cm的条形PVP微滴；

步骤三：吸取含有精子精子的培养基0.09-0.2ml，在PVP条形微滴一侧做长为1.8-2.2cm，宽为0.4-0.6cm的条形微滴；将所有精子沉淀都做成条形微滴0.09-0.2ml，这样就不浪费每一条精子；

步骤四：吸取缓冲培养基在PVP条形微滴另一侧做3-5个10μl圆形微滴，微滴内放入卵子；

步骤五：吸取缓冲培养基在PVP条形微滴正下方做1个10μl圆形微滴，即洗针；