[发明专利]利用交叉引物和双探针恒温扩增检测牛肉源成分的方法

权利要求书

1.用于交叉引物和双探针恒温扩增检测牛源性成分的引物组，其特征在于由一对外围引物、一对交叉引物和一对检测探针引物组成；

其中所述的一对外围引物为：

正向外围引物BOS4s：5’-CGATAAGGGCTACGAGAGG-3’(SEQ ID No:1)，

反向外围引物BOS5a：5’-AGATCATTGTCAGTCATGTTG-3’(SEQ ID No:2)；

所述的交叉引物为：

正向交叉引物BOS2a1s：

5’-TGGGAAAAATAGTAGAAAGTTGATTGTTGGTGTCAGTTCTGGATT G-3’(SEQ ID No:3)，

反向交叉引物BOS1s2a：

5’-TTGTTGGTGTCAGTTCTGGATTGTGGGAAAAATAGTAGAAAGTT GA-3’(SEQ ID No:4)，

所述一对检测探针引物为：

检测探针引物BOS1s2a*：

5’-TTGTTGGTGTCAGTTCTGGATTGTGGGAAAAATAGTAGAAAGTTGA-3’(SEQ ID No:5)，

检测探针引物BOSHP*：5’-ATTTCCAACACAAAACT-3’(SEQ ID No:6)；

其中BOS1s2a*的5’端标记修饰生物素，BOSHP*的5’端标记修饰荧光素FAM。

2.利用交叉引物和双探针恒温扩增检测牛源性成分的试剂盒，其特征在于包括下列6个部分，分别为核酸检测试纸条、SSC缓冲液、恒温扩增反应液、Bst DNA聚合酶液、无菌双蒸水以及阳性对照；其中所述的恒温扩增反应液(A管)括权利要求1所述的一对外围引物、一对交叉扩增引物和一对检测探针引物，以及Thermol pol buffer和dNTPs溶液。

3.按照权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述的恒温扩增反应液(A管)的组成成分及其比例为：正向外围引物BOS4s 0.125μmol/L，反向外围引物BOS5a 0.125μmol/L，正向交叉引物BOS2a1s 1μmol/L，反向交叉引物BOS1s2a 0.5μmol/L，检测探针引物BOS1s2a*0.5μmol/L，检测探针引物BOSHP*0.5μmol/L，dNTPs溶液0.25mmol/L，Betiane甜菜碱0.25M，1×Thermol pol buffer。

4.按照权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述的核酸检测试纸条是指3号核酸检测试纸条。

5.按照权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述的SSC缓冲液的组成成分及其比例为：0.3mol/L NaCl,0.03mol/L柠檬酸钠,用1mol/L HCl调节pH至7.0。

6.按照权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述的1×Thermol pol buffer的组成成分及其比例为：10mM KCl、10mM(NH4)2SO4、20mM Tris-HCl、2mM MgSO4、0.1％TritonX-100、pH8.8。

7.按照权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述的Bst DNA聚合酶液(B管)为Bst DNA聚合酶液(8U/μL)。

8.按照权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述的阳性对照(D管)为含有牛线粒体ATP8基因片段的质粒DNA；所述的牛线粒体ATP8基因片段由SEQ ID No:9所示的核苷酸序列组成。