[发明专利]一种西花蓟马产雄孤雌生殖近亲繁殖种群的建立方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种昆虫的饲养及种群建立技术，特别是西花蓟马产雄孤雌生殖近亲繁殖种群的建立方法。

背景技术

西花蓟马成虫期显著长于未成熟期，且雌虫寿命显著长于雄虫，为通过建立近亲繁殖种群研究其性别决定机制提供了良好的先天条件。以西花蓟马回交繁殖作为起点建立西花蓟马产雄孤雌生殖近亲繁殖种群，借助染色体核型分析、微卫星分析、差异表达蛋白鉴定和生物信息学分析及RNAi等技术手段，对西花蓟马近亲繁殖种群发展的各阶段进行系统检测与对比分析，判断西花蓟马性别决定机制，揭示西花蓟马近亲繁殖种群的遗传结构，克隆与验证性别决定的相关基因。研究结果将初步揭示西花蓟马产雄孤雌生殖性别决定机制及其性别调控机理，丰富和发展产雄孤雌生殖性别决定进化研究理论、为下一步西花蓟马抗逆基因伴性遗传和表达的研究提供坚实的理论技术支撑，并最终为西花蓟马的遗传控制技术的开发提供基础理论依据。但是因西花蓟马个体小，运动快，生命力不强，且单头饲养死亡率更高，若想建立孤雌生殖近亲繁殖的种群更是难上加难，对此尚无好的饲养方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种西花蓟马产雄孤雌生殖近亲繁殖种群的建立方法，克服了西花蓟马个体小运动快，生命力不强，且单头饲养死亡率高的缺点。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

所需材料与器材:1.5ml离心管、10ml离心管、小镊子、滤纸、记号笔、剪刀、刀子、毛笔、托盘(70cm×50cm×5cm)、200目纱网、新鲜的紫甘蓝。

1、材料的准备：将200目的纱网剪成2cm×2cm、3cm×3cm两种规格以备用；将锥子在酒精灯上烧红，在1.5ml离心管的管盖抠出直径3mm的洞，将铁丝圈烧红，在10ml离心管的管盖抠出直径8mm的洞，所有离心管在使用前都要经过高温灭菌；将滤纸剪成底×高为1.5cm×0.5cm和3cm×1cm两种规格的三角滤纸以备用；买新鲜的紫甘蓝去除薄叶，将叶片中间肥厚的部分切成体积大约为3mm×3mm×10mm的小块，和形状统一规则的甘蓝块放入10ml管中；光照培养箱，饲养西花蓟马的环境条件：温度25+1℃，湿度60％-80％，光周期L:D＝14：8。

2、挑选初羽化的雌虫

在1.5ml离心管中放入三角滤纸和小甘蓝块，用毛笔挑取西花蓟马的蛹到1.5ml的离心管中，在管口铺一层裁剪好的小纱网盖上管盖。用镊子定期两天更换甘蓝和三角滤纸保证一管一头虫，饲养至羽化为成虫。

3、产雄孤雌生殖

待虫羽化为成虫，挑选雌虫依次在管盖给虫编号，更换新鲜的甘蓝，之后每天定时用镊子取出甘蓝，放在10ml的离心管中，在管口铺一层裁剪好的大纱网，拧紧管盖，10ml的离心管放入大块甘蓝和三角滤纸，将10ml的离心管对应1.5ml的离心管编号，记录日期，放入光照培养箱中饲养。每天定时观察记录，待虫孵化后定期2天更换新鲜的甘蓝和干燥的三角滤纸。

4、近亲繁殖建立种群

将初羽化的雄性后代随机挑选一头与对应的母代放入同一离心管中回交，并标记为回交亲本，记录日期。每天定期取出甘蓝放入10ml离心管中，同样放入更大块甘蓝，对应编号、记录日期，置于光照培养箱中饲养。每天观察记录，待虫孵化，每隔2天定时更换新鲜的甘蓝和干燥的滤纸。

5、姊妹近亲繁殖

待两性回交的后代羽化为成虫，选取一个雄性后代和一个雌性后代作为第二代姊妹近亲繁殖的对象，按照上述方法连续饲养十代，以备后续试验需要。

6、注意事项：

若饲养过程中回交亲本的父本死亡，母本仍然存活，在母本对应的产雄孤雌生殖的雄性后代中再随机挑选出一头雄虫与之继续回交；若母本死亡，父本仍然存活，将母本的尸体置于1.5ml离心管中，将父本也置于1.5ml离心管中，放在-80℃冰箱中冷冻保存以备后续试验需要。

待大部分产雄孤雌生殖的雄性后代羽化为成虫，根据虫量取适量蓟马置于-80℃冰箱中冷冻保存以备后续试验需要，其他正常饲养，观察记录其发育历期。

本发明所用的1.5ml的离心管空间适宜虫活动，利于观察虫的生长发育状况。

本发明所用的三角滤纸能够吸湿保持管内干燥。

本发明所用的新鲜的甘蓝茎能够提供西花蓟马取食，避免其逃逸或者死亡。

本发明所用的200目纱网和管盖的洞起到保持管内空气流通，避免其逃逸。

本发明挑选处于蛹状态的西花蓟马是为了防止在它羽化之后与其他虫发生交配，保证是孤雌生殖。