[发明专利]一种可逆转肿瘤耐药的肿瘤主动靶向纳米递药系统

权利要求书

1.一种可逆转肿瘤耐药的肿瘤主动靶向纳米递药系统，其特征是递药系统是脂质混合PLGA纳米粒，纳米粒的核为聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)，表面嵌入对甲氧基苯甲酰胺-聚乙二醇-胆固醇连接物(AA-PEG-hyd-CHEMS)和三苯基膦-胆固醇连接物，其中

(1)对甲氧基苯甲酰胺-聚乙二醇-胆固醇连接物(AA-PEG-hyd-CHEMS)的制备方法是：

称取氨基己酸溶解于无水二氯甲烷中；另称取对甲氧基苯甲酰氯溶于无水二氯甲烷中，缓慢加入到上述反应液中，搅拌反应12小时后停止反应，真空旋转蒸干反应液；用适量乙酸乙酯溶解反应物，加入0.5M的盐酸溶液洗涤，收集有机相，加入无水硫酸钠干燥，过滤除去硫酸钠，蒸干有机相，硅胶色谱柱纯化得到对甲氧基苯甲酰胺基己酸；将N,N-二环己基碳二亚胺和4-二甲胺基吡啶(DCC/DMAP)溶于二氯甲烷中，加入对甲氧基苯甲酰胺基己酸，活化6小时后加入末端经氨基修饰的聚乙二醇(NH₂-PEG-NH₂)，同时加入适量三乙胺，继续反应12小时后停止反应，过滤，蒸干反应液。向反应物中加入适量甲醇，透析，冻干得到AA-PEG-NH2；另称取适量乙酰基苯甲酸，溶于二氯甲烷，加入DCC/DMAP，反应液活化6小时后加入AA-PEG-NH₂，同时加入适量三乙胺，反应结束后，过滤，蒸干反应液，用适量甲醇重新溶解产物，透析，冻干，得到AA-PEG-对乙酰基苯甲酸；

称取胆固醇溶解于二氯甲烷中，依次加入丁二酸酐、DMAP、三乙胺，室温搅拌反应；反应结束后，硅胶色谱柱纯化得到胆固醇-琥珀酸单酯(Chol-suc)；将Chol-suc、DCC、DMAP溶解于二氯甲烷中，活化6小时后加入肼基甲酸叔丁酯(BOC-NH-NH₂)和三乙胺，反应结束后用硅胶色谱柱纯化得到胆固醇-琥珀酸-NHNHBOC；将上述产物溶于二氯甲烷，加入三氟乙酸，常温反应2小时，反应结束后加入水相洗去三氟乙酸，再用二氯甲烷萃取反应液，收集有机相，干燥、蒸干得到胆固醇-琥珀酰肼(Chol-NHNH₂)；

称取AA-PEG-对乙酰基苯甲酸以及Chol-NH-NH₂溶于二氯甲烷中，加入少量三氟乙酸，搅拌反应，反应结束后，蒸干反应液，用少量甲醇溶解，透析冻干得到具有酸敏特性的终产物对甲氧基苯甲酰胺-聚乙二醇-胆固醇连接物(AA-PEG-hyd-CHEMS)；

(2)三苯基膦-胆固醇连接物(TPP-CHEMS)的制备方法是：

将(3-丙羧基)三苯基溴化膦与DCC/DMAP溶于二氯甲烷中，活化6小时后加入己二胺，反应24小时后停止反应，过滤，蒸干反应液，硅胶柱层析纯化得到中间体；另取胆固醇-琥珀酸单酯溶于二氯甲烷中，加入DCC/DMAP活化6小时后加入上述中间体，反应24小时后停止反应，过滤，蒸干反应液，硅胶柱层析纯化得到三苯基膦-胆固醇琥珀酸酯(TPP-CHEMS)；

(3)脂质混合PLGA纳米粒的制备方法是：

称取一定量的PLGA、TPP-CHEMS与AA-PEG-hyd-CHEMS溶于二氯甲烷中(V₁)，另将盐酸阿霉素溶于蒸馏水中(V₂，V₁≥V₂)，混合上述液体，超声，再加入3％的聚乙烯醇(PVA，V₃，V₃≥V₁)，超声，转移到烧杯中，室温搅拌3h，离心(15000rpm,15min)，得到的沉淀用蒸馏水冲洗三次，用蒸馏水重新分散，即得纳米粒。