[发明专利]一种富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的鹰嘴豆乳的制备方法

权利要求书

1.一种富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的鹰嘴豆乳的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)、将产纳豆激酶兼吡咯喹啉醌的纳豆芽孢杆菌10261和纳豆芽孢杆菌10263分别进行亚硝基胍诱变；然后混合二者诱变后代，进行细胞融合传代培养，高通量筛选得到高产纳豆激酶兼吡咯喹啉醌的纳豆芽孢杆菌，命名为纳豆芽孢杆菌BN-NKPQQ-RWX-207；

2)、将干酪乳杆菌进行亚硝基胍诱变，从中筛选出甲硫氨酸营养缺陷型的干酪乳杆菌，命名为干酪乳杆菌LcS-Met^-；

3)将纳豆芽孢杆菌BN-NKPQQ-RWX-207和干酪乳杆菌LcS-Met^-共发酵鹰嘴豆汁，得到富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的鹰嘴豆乳。

2.根据权利要求1所述的富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的鹰嘴豆乳的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述的高通量筛选具体包括：①制备2个平板豆芽汁鹰嘴豆汁固体培养基，其中一个将小鼠抗PQQ IgG单抗PQQ-mAb配入，形成平板A，另一个将琼脂糖-纤维蛋白配入，形成平板B；②将纳豆芽孢杆菌10261和纳豆芽孢杆菌10263的诱变融合后代涂布其中一个平板后，再用纤维素膜影印至另一个平板，使平板A和平板B互为影印平板；③平板A中，高产吡咯喹啉醌的诱变融合后代菌落周围形成肉眼可见沉淀圈，根据沉淀圈直径大小可肉眼判断产吡咯喹啉醌量大小；④平板B中，高产纳豆激酶的诱变融合后代菌落周围形成透明圈，根据透明圈直径大小可肉眼判断产纳豆激酶活力高低；⑤平板A与平板B中，高产吡咯喹啉醌菌落与高产纳豆激酶菌落处于同一位置者，即为高产纳豆激酶兼吡咯喹啉醌的纳豆芽孢杆菌。

3.根据权利要求2所述的富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的鹰嘴豆乳的制备方法，其特征在于，步骤1)中，所述的平板豆芽汁鹰嘴豆汁固体培养基以1L计，由以下量的组分组成：

4.根据权利要求1所述的富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的鹰嘴豆乳的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述的从中筛选出甲硫氨酸营养缺陷型的干酪乳杆菌，具体包括：①制备2个平板MRS固体培养基，其中一个将甲硫氨酸配入，为平板C，另一个为单纯MRS固体培养基平板，为平板D；②将诱变后的干酪乳杆菌涂布其中一个平板后，再用纤维素膜影印至另一个平板，使平板C和平板D互为影印平板；③在平板C与平板D的同一位置，平板C出现菌落而平板D未出现菌落，或平板C上的菌落显著大于平板D上的菌落，则该菌落为甲硫氨酸营养缺陷型干酪乳杆菌。

5.根据权利要求4所述的富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的鹰嘴豆乳的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述的平板MRS固体培养基以1L计，由以下量的组分组成：

该MRS固体培养基的pH值保持在6.2～6.4。

6.根据权利要求1所述的富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的鹰嘴豆乳的制备方法，其特征在于，步骤3)中，在共发酵之前，将纳豆芽孢杆菌BN-NKPQQ-RWX-207和干酪乳杆菌LcS-Met^-分别进行活化培养，纳豆芽孢杆菌BN-NKPQQ-RWX-207在豆芽汁鹰嘴豆汁液体培养基中进行活化培养，培养温度为34～36℃，干酪乳杆菌LcS-Met^-在MRS液体培养基中进行活化培养，培养温度为36～38℃。

7.根据权利要求6所述的富含纳豆激酶和吡咯喹啉醌的鹰嘴豆乳的制备方法，其特征在于，步骤3)中，所述的豆芽汁鹰嘴豆汁液体培养基以1L计，由以下量的组分组成：

鹰嘴豆汁  100～150mL；

蔗糖      4.0～6.0g；

豆芽汁    余量；

所述的MRS液体培养基以1L计，由以下量的组分组成：

该MRS液体培养基的pH值保持在6.2～6.4。