[发明专利]短小芽孢杆菌和蛭弧菌的液体制剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及饲料添加剂技术领域，具体地说，是短小芽孢杆菌和蛭弧菌的液体制剂的制备方法。 

背景技术

弧菌属于弧菌科弧菌属，是一类革兰氏阴性、具极生鞭毛、能运动、无芽孢的短杆状细菌，其中有的弧菌有一定的弯曲，欠柔软，有的弯曲不明显。弧菌是海洋细菌的优势类群之一，广泛分布于世界各地各类河口、内湾、沿岸、水体养殖区和外海的水体及沉积物中，各种海洋生物体表或体内也常生存着高密度海洋弧菌，在海洋环境中占据着重要的生态地位，具有多种多样的生理、生态功能，在海洋微食物环中扮演重要角色，对海洋的营养物的循环起着非常重要的作用。但同时，弧菌又是水生动物中的一类重要的病原菌。 

随着高密度海水养殖业快速发展，对养殖环境的污染日益加剧。水产品的病害已成为海水养殖业发展的主要问题。弧菌病是由弧菌属细菌引起的一类细菌性疾病，该病在全球范围内广泛发生，其爆发性流行不仅给海水养殖鱼类、贝类及甲壳类等经济动物的养殖业造成巨大的经济损失，还导致野生的海水鱼类、贝类及甲壳类的大量死亡。弧菌病是最严重的疾病之一，其死亡率甚至高达100％。 

为了控制病害，通常过度使用抗生素类药物，这不仅造成养殖产品的药物残留，而且还提高了病原细菌的耐药性，引起抗性基因的转移，导致生态失调。2005年，欧盟已禁止在动物养殖中使用一切非治疗性抗生素。因此，寻找抗生素的替代药物、探索新的防治方式已经迫在眉睫。 

中国专利文献CN101275119公开了一种蛭弧菌在消除淡水产品及其养殖水体中致病菌的应用，特别适用于消除淡水产品食用或加工前、运输过程及其养殖水体中携带的致病菌。在污染了致病菌的淡水产品养殖水体中、食用前、加工前或运输过程中加入蛭弧菌浓缩液，使其浓度至少达到10³pfu/ml。淡水产品食用或加工前、运输过程中或养殖水体中应用该法时，蛭弧菌游泳体浓度范围分别为10⁵～10¹³pfu/ml；10⁴～10¹²pfu/ml；10³～10⁷pfu/ml。中国专利文献CN101948784A公开了一种蛭弧菌制剂及其发酵方法和应用。发酵方法包括以下步骤：(1)宿主菌悬液的制备；(2)蛭弧菌游泳体浓缩液的制备；(3)蛭弧菌 制剂的制备。中国专利文献CN103719535A公开了一种噬菌蛭弧菌微胶囊，所述微胶囊的壁为明胶，颗粒呈球形，表面有凹陷，但没有孔和裂纹，所述颗粒粒径大小为3～12μm，分布基本均匀，且其中，噬菌蛭弧菌的含量为3.69×10⁷pfu/g～3.70×10⁷pfu/g，大肠杆菌DH5α的含量为8.6×10⁹pfu/g～2.10×10¹⁰pfu/g。该微胶囊的制备方法，其包括步骤：1)大肠杆菌DH5α菌悬液的制备；2)噬菌蛭弧菌培养液的制备；和3)将步骤1)的大肠杆菌DH5α菌悬液和步骤2)的噬菌蛭弧菌培养液与无菌明胶溶液均匀混合后，进行喷雾干燥，最终制备成微胶囊。中国专利文献CN104099268A公开了一种水产养殖复合微生物菌剂，其包括如下菌剂及其重量份：枯草芽孢杆菌5-10份，地衣芽孢杆菌0.5-4份，巨大芽孢杆菌1-6份，胶质红假单胞菌0.2-1份，荚膜红假单胞菌0.5-3份，噬菌蛭弧菌2-8份。中国专利文献CN101356927公开了一种蛭弧菌在消除海产品及其养殖水体中致病性弧菌的应用，在污染了致病性弧菌的海产品和/或养殖水体中加入蛭弧菌浓缩液，使蛭弧菌的浓度至少达到10²pfu/ml。海产品食用前、运输过程以及养殖水体中应用该法时，蛭弧菌浓度范围分别为10⁴～10¹²pfu/ml、10³～10¹¹pfu/ml、10²～10⁶pfu/ml。 

中国专利文献CN103525723A公开了一种具有群体感应系统抑制作用的短小芽孢杆菌，其保藏编号为CCTCC M 2013240。该发明还提供这种短小芽孢杆菌的应用以及以这种短小芽孢杆菌或其发酵液为活性成分的微生物制剂。该发明以紫色杆菌为筛选模型，利用“T”型划线法和滤纸片法筛选出一株能够抑制紫色杆菌紫色色素产生的菌株F3-1，试验结果表明菌株F3-1能够抑制紫色杆菌的QS信号分子，具有抑制细菌群体感应的作用，可用于制备防治水产细菌性病害的微生物制剂。