[发明专利]一种初步探讨砷中毒大鼠肾损伤的敏感生物学标志及其接触限值的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种初步探讨砷中毒大鼠肾损伤的敏感生物学标志及其接触限值的方法，属于卫生检测技术领域。

背景技术

燃用高砷煤引起的砷中毒为中国特有的一种病型，贵州省于1976年被确定为其首个病区[2]。相关研究显示砷中毒可导致多系统、多器官病变，鉴于肾脏为主要排毒器官，当其受损时可影响体内砷及其代谢产物的排泄，还可促进其蓄积，导致肾脏在内的多器官受损。目前，临床上常选用尿素氮（BUN）、血肌酐（SCr）等作为检测肾功能的指标，以判断肾损伤情况；本课题组前期对砷中毒人群研究结果发现，监测尿β2-微球蛋白(Uβ2-MG）、尿N-乙酰-β- D-氨基葡萄糖苷酶(UNAG) 、尿白蛋白(UAlB)对判断早期肾损伤具有重要意义。本实验以砷中毒大鼠肾脏毒性效应及其剂量—效应关系为基础，计算各肾损伤效应指标对应的UAs和KAs的基准剂量及其95％可信区间下限值，以其值筛选砷中毒大鼠肾损伤的敏感生物学标志及估测其接触限值，以达到快速、灵敏、早期发现肾损伤。

发明内容

本发明的目的是：提供一种初步探讨砷中毒大鼠肾损伤的敏感生物学标志及其接触限值的方法，能直观的发现肝脏的损害情况。

本发明的技术方案

一种初步探讨砷中毒大鼠肾损伤的敏感生物学标志及其接触限值的方法，该方法采用砷对大鼠进行经口亚慢性灌胃染毒，采用氢化物发生器-电感耦合等离子体离子发射光谱法测定大鼠尿砷（UAs）、肾砷（KAs），ELISA法测定尿β2-微球蛋白(Uβ2-MG）、尿白蛋白(UAlB)，对-硝基苯酚比色法、碱性苦味酸法、脲酶比色法分别测定尿N-乙酰-β- D-氨基葡萄糖苷酶(UNAG)、血肌酐（SCr）、血尿素氮 (BUN）；以UAs、KAs作为暴露指标，其余指标为肾损伤效应指标，分析两者间的剂量—效应关系；计算各肾损伤效应指标对应的UAs和KAs的基准剂量及其95％可信区间下限值，以其值筛选砷中毒大鼠肾损伤的敏感生物学标志及估测其接触限值。

    前述的一种初步探讨砷中毒大鼠肾损伤的敏感生物学标志及其接触限值的方法中，SD大鼠40只，雌雄各半，体重80～100g左右，染毒前适应性饲养1周，自由进食饮水，染毒前适应性饲养1周，自由进食饮水。

    前述的一种初步探讨砷中毒大鼠肾损伤的敏感生物学标志及其接触限值的方法中，将大鼠分为4组：正常对照组、砷低剂量组、砷中剂量组、砷高剂量组，染砷剂量分别为0mg/kg、 2.5mg/kg、5.0mg/kg、 和10.0mg/kg，每组10只，分笼喂养；其中正常对照组大鼠喂饲标准饲料；各染砷组大鼠喂饲高砷煤烘烤的玉米粉与标准饲料按比例配制的饲料，喂养90天。

    由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，由于砷中毒大鼠肾脏毒性效应及其剂量—效应关系为基础，计算各肾损伤效应指标对应的UAs和KAs的基准剂量及其95％可信区间下限值，以其值筛选砷中毒大鼠肾损伤的敏感生物学标志及估测其接触限值，其对早期发现砷中毒肾损伤与原始检测方法对比更具价值，并为砷中毒人群肾损伤生物接触限值的探索提供了实验依据。

具体实施方式下面对本发明进一步的详细说明，但不作为对本发明的任何限制。

本发明的实施例：

1 材料与试剂

1.1  实验对象

    健康Wistar大鼠40只，雌雄各半，体重80～100g左右。

1.2  主要试剂

盐酸，尿素，碘化钾，氢氧化钠，硼氢化钠，硫酸，高氯酸，草酸铵，硝酸（以上试剂均为分析纯）；血清BUN、SCr检测试剂盒均购自中生北控生物科技股份有限公司； UNAG、Uβ2-MG、UAlB、UCr检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.3  主要仪器

    MPX型电感耦合等离子体离子发射光谱仪（ICP-OES）；VGA-77型氢化物发生器（HG）；AG285型电子天平；Milli-Q Synthesis纯水仪。

2 方法

2.1  实验动物分组及染砷

    将大鼠分为4组：正常对照组、砷低剂量组、砷中剂量组、砷高剂量组，染砷剂量分别为0mg/kg、 2.5mg/kg、5.0mg/kg、 和10.0mg/kg，每组10只，分笼喂养；其中正常对照组大鼠喂饲标准饲料；各染砷组大鼠喂饲高砷煤烘烤的玉米粉与标准饲料按比例配制的饲料，喂养90天，期间自由饮用自来水；饲养环境：温度22-24℃；湿度60-70%。

2.2  观察内容和方法