[发明专利]用荧光免疫层析技术检测犬瘟热病毒的试纸条和方法

说明书

技术领域

本发明涉及纳米材料技术、免疫学技术、侧流层析技术等领域。更具体的，本发明涉及一种用荧光免疫层析技术检测犬瘟热病毒的试纸条；此外，本发明还涉及一种用荧光免疫层析技术来检测犬瘟热病毒的方法。

背景技术

犬瘟热病毒主要感染犬科动物，感染后症状主要局限于上呼吸道，所以会咳嗽、流鼻涕，未经免疫的幼犬很可能出现严重症状，如肺炎、腹泻、脱水、厌食等，很容易死亡。

如果犬感染了犬瘟热病毒，需要尽早检测并及早治疗。检测犬瘟热病毒的传统方法是胶体金免疫层析法，但是胶体金免疫层析灵敏度较低，稳定性也不够好，容易出现假阴假阳。我公司开发的荧光免疫层析法检测犬瘟热病毒的试剂盒灵敏度很高，可检测到10ng/ml的犬瘟热病毒抗原，对犬瘟热病毒感染的犬能早检出早隔离早治疗，提高幼犬的成活率，同时因为灵敏度提高，极大地减少了假阴假阳的出现，提高了产品的稳定性，因此具有重要的应用前景。

发明内容

本发明旨在解决本领域中的上述各种问题和实现以下目标。具体地，本发明的目的就是要提供一种方便、快速而且高灵敏度的地检测犬瘟热病毒的试纸条和方法。

具体的，本发明提供了一种用荧光免疫层析技术检测犬瘟热病毒的试纸条。

在一种实施方式中，本发明提供了一种用荧光免疫层析技术检测犬瘟热病毒的试纸条，包括标记物垫和捕获膜，其特征在于，所述标记物垫含有荧光微球标记的犬瘟热病毒检测抗体，所述捕获膜含有捕获探针。

在进一步的实施方式中，其特征在于，所述荧光微球是时间分辨荧光微球。

在进一步的实施方式中，其特征在于，所述时间分辨荧光微球是含铕复合物的荧光微球。

在另一种实施方式中，本发明提供了一种用荧光免疫层析技术检测犬瘟热病毒的方法，其特征在于，在所述的试纸条样品垫上滴加含犬瘟热病毒的样品，反应后检测荧光信号。

在另一种实施方式中，本发明提供了一种用荧光免疫层析技术检测犬瘟热病毒的试剂盒，包含试剂瓶和试纸条，其中试纸条又包含标记物垫和捕获膜，其特征在于，所述试剂瓶含有荧光微球标记的犬瘟热病毒检测抗体，所述捕获膜含有捕获探针。

在进一步的实施方式中，其特征在于，所述荧光微球是时间分辨荧光微球。

在另一种实施方式中，本发明提供了一种用荧光免疫层析技术检测犬瘟热病毒的方法，其特征在于，在所述的试剂瓶中加入含犬瘟热病毒的样品，混合后滴加到试纸条样品垫上，反应后检测荧光信号。

详细说明

用荧光免疫层析技术检测犬瘟热病毒的试纸条如图1示，包括样品垫1，标记物垫2，NC膜3，吸水纸4，PVC底板5。NC膜3上含有C线6和T线7。

其中样品垫一般为玻璃纤维、滤纸或滤血膜。标记物垫可为玻璃纤维、滤纸或聚酯膜。当样品垫和标记物垫材质相同时可整合在一起，用一条玻璃纤维、滤纸或聚酯膜来完成样品垫和标记物垫的功能。

所述标记物垫上或者含有荧光微球标记的犬瘟热病毒检测抗体，或者同时含有荧光微球标记的犬瘟热病毒检测抗体和生物素标记的犬瘟热病毒捕获抗体，还可以含有其他用作阳性对照的荧光微球标记的犬瘟热病毒或抗体，如链亲和素或兔抗体。如果试剂盒中有试剂瓶，则标记物垫可以仅仅是玻璃纤维、滤纸或聚酯膜而不含荧光微球或抗体。

捕获膜可以是硝酸纤维素膜（NC膜）、尼龙膜等，所述捕获膜的T线或者含有犬瘟热病毒捕获抗体（双抗体夹心法），或者含链亲和素（标记物垫同时含荧光微球标记的犬瘟热病毒检测抗体和生物素标记的犬瘟热病毒捕获抗体），C线或者含有能结合犬瘟热病毒检测抗体的二抗，或者含生物素标记的牛血清白犬瘟热病毒或卵清犬瘟热病毒（标记物垫含链亲和素），或者含羊抗兔抗体（标记物垫含兔抗体）。

用免疫层析技术检测犬瘟热病毒的方法，如图1示，当样品溶液滴加到试纸条的样品垫1上后，液体将沿水平箭头方向移动，先到达标记物垫2，样品中的犬瘟热病毒与标记物垫2中荧光微球标记的犬瘟热病毒检测抗体结合形成‘犬瘟热病毒-犬瘟热病毒检测抗体-荧光微球’复合物，当溶液继续移动到达捕获膜的T线时，溶液中的‘犬瘟热病毒-犬瘟热病毒检测抗体～荧光微球’将与此处的犬瘟热病毒捕获抗体形成‘犬瘟热病毒捕获抗体-犬瘟热病毒-犬瘟热病毒检测抗体～荧光微球’复合物并被固定在T线上，随后用检测仪来检测T线上的荧光信号，根据信号强度可以判断犬瘟热病毒浓度的高低，荧光信号强则犬瘟热病毒浓度高。