[发明专利]一种具有粘膜免疫佐剂活性的多肽及其在制备粘膜免疫佐剂中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学、预防医学领域，具体涉及一种具有粘膜免疫佐剂活性的多肽及其在制备粘膜免疫佐剂中的用途。

背景技术

粘膜免疫系统(mucosal immune system,MIS)是全身免疫系统的重要组成部分，包括肠粘膜相关淋巴组织、鼻咽粘膜相关淋巴组织、泌尿生殖道粘膜相关淋巴组织等，作为机体免疫屏障的第一道防线，MIS可有效抵抗各种微生物的入侵。与皮下或肌肉注射免疫相比，粘膜免疫比传统的免疫方式更具有优势。首先是免疫途径的差异，粘膜免疫主要采用口服、滴鼻或生殖道接种的方法，这种新型的免疫方式可避免针剂对机体刺激，减少针尖对皮肤损伤引起的炎症反应，且可多次重复接种。其次在机体的生殖道、消化道等部位广泛存在有共同粘膜免疫组织，基于此，如果某个部位的粘膜组织发生抗原提呈后产生的免疫反应通常可以刺激诱导较远的粘膜免疫应答。研究发现，粘膜免疫不仅能诱导粘膜组织分泌特异性sIgA中和表面毒素，还能同时诱导体液免疫应答，产生针对抗原的特异性抗体。

鼻粘膜的淋巴组织主要由双侧咽峡管、双侧咽淋巴环、鼻咽扁桃体、腭扁等结构组成，统称为鼻粘膜相关淋巴组织(nasal mucosal-associated lymphoid tissue，NALT)。NALT中定居有树突细胞、淋巴细胞、巨噬细胞和M细胞等免疫细胞。研究表明，NALT是诱导局部和广泛粘膜免疫应答的重要组成部分。鼻腔免疫是一种方便高效的免疫方法。鼻腔粘膜免疫的优势在于：(1)鼻腔中蛋白酶含量较少，鼻腔免疫抗原需求量少，佐剂量小；(2)无酸性环境和酶对疫苗产生影响；(3)鼻腔免疫操作简单,不需购买专门器械,而且可避免注射引起病菌感染，特别是对于群聚人群来讲，此种免疫方法可增加建立群体免疫的机会。另外，鼻腔免疫可诱导体液免疫和细胞免疫，并引起广泛的粘膜免疫应答。

目前报道的鼻粘膜免疫的佐剂主要为细菌毒素，如，大肠杆菌不耐热肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT)和霍乱毒素(cholera toxin，CT)是有效的粘膜免疫佐剂。但他们存在的毒性限制了临床应用例如，美国于2003年上市的一种流感疫苗以LT为佐剂，接种后中发现其可产生贝尔麻痹等严重副作用而停止使用。

为了避免毒性，人们试图将CT和LT的B亚单位用做佐剂，不过，由于LTB和CTB都含有100多个氨基酸，分子量较大，只能通过基因工程生产，工艺复杂，制备成本高。而且，由于对其安全性的担忧，FDA至今没有批准用于临床。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种新的具有粘膜免疫佐剂活性的小分子多肽及其用途。

本发明多肽，它的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明还提供了前述多肽在制备免疫佐剂中的用途。

其中，所述免疫佐剂是具有粘膜免疫佐剂活性的佐剂。

本发明还提供了一种免疫佐剂，它是氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示的多肽，加上药学上可接受的辅助形成分制备而成的制剂。

发明人偶然发现本发明小分子多肽，其仅仅含有8个氨基酸，分子量约880Da，远远小于LTB和CTB，然而，其粘膜免疫佐剂活性却与大分子LTB相当，取得了意料不到的技术效果。

同时，本发明小分子多肽无毒副作用，安全有效，可以和目前广泛使用的疫苗抗原联合应用，并且，由于是小分子肽，可以自动化合成，性能更加稳定，质量容易控制，人用安全性高，成本低廉。

综上，本发明小分子多肽安全、有效、稳定、可控，有望用于人体，临床应用前景良好。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1本发明中粘膜免疫佐剂活性及其量效关系检测结果，所测样本为血清中的EVP1特异性抗体滴度，EVP1组与EVP1+PT10，EVP1+PT20组间差异显著(p<0.05)。PT代表本发明的粘膜免疫佐剂多肽。数字代表多肽含量(μg/只)。

图2本发明中粘膜免疫佐剂活性与LTB比较的检测结果，所测样本为血清中的EVP1特异性抗体滴度，EVP1组与EVP1+PT，EVP1+LTB组间差异显著(p<0.05)。EVP1+PT，与EVP1+LTB组间在24日的数据差异不显著(p>0.05)，PT代表本发明的粘膜免疫佐剂多肽。