[发明专利]放线菌素D的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种产生放线菌素D的放线菌在生产放线菌素D中的应用，所述菌株为易变链霉菌（Streptomyces mutabilis）TRM45540，于2014年4月14日保藏于U.S. Department ofAgriculture Agricultural Research Service (ARS) Culture Collection，保藏号为NRRL B-59117；

包括下述步骤：在合适条件下培养所述放线菌，获得发酵液；从发酵液中分离纯化放线菌素D；

其中，培养所述放线菌的培养基配方和培养条件为：玉米粉15g/L，蛋白胨5g/L，葡萄糖5g/L，CaCO₃ 1g/L，NaCl 40 g/L，调节pH为7.2-7.4，其中玉米粉煮沸20min，四层纱布过滤取汁使用；按6%的接种量接种于发酵培养基中，28℃、180rpm条件下摇床培养7天。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：从发酵液中分离纯化放线菌素D的方法具体为：

发酵液滤过后，湿法上样到D101或AB-8大孔树脂色谱柱大孔树脂；然后分别用2倍柱体积的清水、10%乙醇溶液、30%乙醇溶液、50%乙醇溶液、70%乙醇溶液、95%乙醇溶液洗脱；合并70-95%乙醇洗脱液，减压浓缩去掉溶剂后得到富含放线菌素D的发酵液70-95%乙醇浸膏。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：从发酵液中分离纯化放线菌素D的方法进一步包括如下步骤：将发酵液70-95%乙醇浸膏烘干后先用甲醇常温超声溶解，甲醇可溶部分再用丙酮溶解，丙酮可溶部分回收丙酮溶剂后得到桔红色粉末，放线菌素D的含量达到90%以上。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：从发酵液中分离纯化放线菌素D的方法进一步包括如下步骤：将丙酮萃取获得的桔红色粉末甲醇溶解后过Sephadex LH-20 色谱柱，收集并合并棕黄色～桔红色部位，回收甲醇溶剂后得纯度98%以上的桔红色放线菌素D纯品。