[发明专利]一株微小拟双孢藻及其应用和培养方法

说明书

技术领域

发明属于生物能源领域，涉及一种微小拟双孢藻及其应用，更具体地，本发明涉及一株新的微小拟双孢藻藻株，其油脂含量高，可用于制备生物柴油。

背景技术

由于地球上的化石能源储量正日益减少，石油资源很有可能会在短时间内便迅速枯竭。化石能源的蕴藏量并不是无穷无尽的，易于开采和利用的化石能源储量已经所剩无几，剩余储量因为开发难度越来越大，从而失去继续开采的价值。在世界能源消费以石油为主导的情况下，如果能源消费结构仍不变化，那么就会发生新一代的能源危机。煤炭资源虽比石油资源储存量要大，但也不是取之不尽用之不竭的。目前除了煤炭之外，能够大规模利用开发的能源还是很少。虽然太阳能的资源是取之不竭源源不断的，但因其开发利用所耗成本高昂，所以在短时间内仍不可能迅速发展得到广泛应用。

因此人类必须及时找到一种可以代替非再生矿物能源的新能源，从而将注意力转移到新的能源结构上，尽早探索、研究开发利用新能源资源，这样才能让人类的生活在安定和谐的情况下持续发展下去，而生物柴油正好可以将此问题解决。像生物柴油这种可再生的碳中性能源，有利于环境和经济的可持续发展。目前的研究也表明了微藻是能够完全替代化石柴油的唯一生物柴油。生物柴油和化石燃料本质上都来源于光合作用产物。绿色植物进行光合作用，将水、二氧化碳和其他无机物依靠光能合成各种有机物并释放出氧气，动物和微生物才能生长繁殖。各种生物的油脂都是从植物合成的有机物转化来的。任何形式的来自动物、植物和微生物的脂肪酸都能用作生物柴油的原料。因此，油脂含量高的藻种才是制备生物柴油的最重要原料。

利用微藻加工制备生物柴油的关键，一是提高原始藻种的油脂含量，二是通过优化培养尽可能提高微藻细胞的油脂含量。在单细胞微藻的培养过程中，培养基成分、温度、光照强度、pH、培养方式、通气量、盐度等均会影响微藻的生长以及其脂肪酸的含量与组成。温度、光强能影响微藻的光合作用和呼吸作用，从而对其生长及体内生化成分产生影响。微藻具有生长速率快、收获时期短、光合利用率高等特点，利用微藻作为生物柴油原材料有很高的应用前景。高油脂含量、高生长速率的藻株是该环节的关键步骤。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：第一是提供一种微小拟双孢藻新种；第二是提供微小拟双孢藻在生物柴油生产中的应用；第三是在于该新种存在种内的内含子存在/缺失多样性，可以作为研究内含子进化的模式生物；第四在于提供上述拟双孢藻的培养方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：

一种微小拟双孢藻，从黄海海水中分离得到的，分类命名为微小拟双孢藻Amphikrikos minutum，于 2014年10月 22日 保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏登记号为CGMCC No. 9815。

所述拟双孢藻的采集方法为浮游植物脱网；分离方法采用微吸管吸取、逐级稀释分离及平板涂布法。

培养方法，其具体操作步骤如下：在海水F/2培养基中富集培养微藻，初始接种密度为1×10⁵ 个·mL^-1，置于光暗比为 14h∶10h， 光照强度为 1100lux， 温度为 25℃， 相对湿度为 70％~80%的人工气候箱中培养1-3周，离心微小拟双孢藻藻液。收获拟双孢藻。优选的，人工气候箱中培养2周。

上述的F/2培养基中每1L海水中含有以下物质：NaNO₃：75毫克；NaH₂PO₄·H₂O：5毫克；Na₂SiO₃·9H₂O：20毫克；Na₂EDTA：4.36毫克；FeCl₃·6H2O：3.16毫克；CuSO₄·5H₂O：0.01毫克；ZnSO₄·7H₂O：0.023毫克；CoCL₂·6H₂O：0.012毫克；MnCL·4H₂O：0.18毫克；Na₂M_OO₄·2H₂O：0.07毫克；维生素B1：0.1微克；维生素B12：0.5微克；生物素：0.5微克。

所述的微小拟双孢藻在制备生物柴油上的应用。

所述的微小拟双孢藻在作为研究内含子进化的模式生物上的应用。