[发明专利]一种制备猪伪狂犬病病毒疫苗的方法及疫苗制品

权利要求书

1.一种制备猪伪狂犬病病毒疫苗的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)制备悬浮传代细胞；

(2)扩增培养所述步骤(1)制备的悬浮传代细胞；以及

(3)在所述步骤(2)扩增培养后的悬浮传代细胞接种伪狂犬病病毒，扩增培养伪狂犬病病毒。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述传代细胞包括BHK-21细胞；

所述伪狂犬病病毒毒株包括伪狂犬病病毒变异株，优选地，所述伪狂犬病病毒毒株包括猪伪狂犬病病毒HN1201株、猪伪狂犬病病毒HN1201株gE基因缺失株及其培养物(5-35代以内)的活的全病毒。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中扩增培养悬浮传代细胞采用连续放大方式培养，所述连续放大方式中单次培养前悬浮传代细胞浓度为0.2×10⁶个/ml～2×10⁶个/ml，所述单次培养过程至悬浮传代细胞浓度为1×10⁶个/ml～10×10⁶个/ml时结束。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中扩增培养悬浮传代细胞采用连续放大方式培养，所述连续放大方式中单次培养前悬浮传代细胞浓度为0.6×10⁶个/ml～1×10⁶个/ml，所述单次培养过程至悬浮传代细胞浓度为3×10⁶～6×10⁶个/ml时结束。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中所述传代细胞于方瓶中静止培养，培养2～4d后收集液体中漂浮的活细胞；

所述步骤(2)中用摇瓶或磁力搅拌瓶培养悬浮传代细胞，摇瓶培养的条件为5％CO₂,37℃，90～100rpm，所述磁力搅拌瓶培养的条件为5％CO₂，37℃，30rpm；或

所述步骤(2)中用生物反应器培养悬浮传代细胞，所述生物反应器培养参数为pH7.0～7.4,温度为36～38℃，溶氧(Do)为30％～60％，搅拌速度为50rpm～100rpm。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中所述伪狂犬病病毒接毒剂量为0.0005～5M.O.I，优选为0.005～0.5M.O.I；在所述伪狂犬病病毒接种24h～72h后(或细胞病变80％后)收获病毒液。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中采用连续放大方式扩增培养悬浮传代细胞为灌流和流加连续培养。

8.一种根据权利要求1-7任一项所述方法制备的猪伪狂犬病病毒疫苗。

9.根据权利要求8所述的猪伪狂犬病病毒疫苗，所述猪伪狂犬病病毒疫苗含量为灭活前10^10.0TCID₅₀/ml。