[发明专利]一种土壤抗生素污染的诊断方法

权利要求书

1.一种土壤抗生素污染的诊断方法，包括以下步骤：

(1)将肝细胞接种到一组抗生素浓度呈梯度分布的培养基中培养，培养一段时间后检测培养基中肝细胞分泌的酶的活性；

(2)建立培养基中抗生素浓度与所述酶的活性之间的关系曲线；

(3)将肝细胞接种到含待测土壤浸提液的培养基中培养，培养一段时间后检测相应酶的活性，根据关系曲线计算得到待测土壤中抗生素的浓度；

所述酶为乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶或丙氨酸氨基转移酶。

2.根据权利要求1所述的土壤抗生素污染的诊断方法，其特征在于，所述肝细胞为人体肝细胞HL-7702。

3.根据权利要求1所述的土壤抗生素污染的诊断方法，其特征在于，所述抗生素为四环素或青霉素。

4.根据权利要求1所述的土壤抗生素污染的诊断方法，其特征在于，采用线性回归或一元二次方程拟合建立关系曲线。

5.根据权利要求4所述的土壤抗生素污染的诊断方法，其特征在于，所述关系曲线为：

y₁＝0.1258x₁+146.67，R²＝0.9591，0≤y₁≤2500；

y₁＝0.0002x₂+0.9604，R²＝0.8757，0≤y₁≤2500；

y₁＝0.0091x₃+2.685，R²＝0.9677，0≤y₁≤500；

y₂＝0.1009x₁+69.717，R²＝0.8727，0≤y₂≤2500；

y₂＝0.0003x₂+0.9681，R²＝0.9135，0≤y₂≤2500；

y₂＝0.0025x₃+3.1936，R²＝0.9552，0≤y₂≤2500；

y₁为四环素的浓度，单位为μg·L^-1；y₂为青霉素的浓度，单位为μg·L^-1；x₁为乳酸脱氢酶的活性，单位为U/L；x₂为碱性磷酸酶的活性，单位为Kim unit/100ml；x₃为丙氨酸氨基转移酶的活性，单位为卡门氏单位；R²为相关系数。

6.根据权利要求1所述的土壤抗生素污染的诊断方法，其特征在于，步骤(1)和(3)中细胞培养时间为不少于4小时。

7.根据权利要求1所述的土壤抗生素污染的诊断方法，其特征在于，所述培养基为无血清DMEM高糖培养基。

8.根据权利要求1所述的土壤抗生素污染的诊断方法，其特征在于，所述肝细胞的接种密度为1×10⁵～1×10⁶个/ml。

9.根据权利要求1所述的土壤抗生素污染的诊断方法，其特征在于，所述肝细胞的培养条件：温度为37℃，CO₂体积浓度为5％。

10.根据权利要求1所述的土壤抗生素污染的诊断方法，其特征在于，所述土壤浸提液稀释50～100倍。