[发明专利]一种胃蛋白酶酶解鉴定大分子胶原蛋白或明胶的方法有效
| 申请号： | 201410766878.6 | 申请日： | 2014-12-11 |
| 公开（公告）号： | CN104535637A | 公开（公告）日： | 2015-04-22 |
| 发明（设计）人： | 段蕊;张俊杰;王永久;蔡学东;张建东 | 申请（专利权）人： | 淮海工学院;连云港金水湾食品有限公司 |
| 主分类号： | G01N27/447 | 分类号： | G01N27/447 |
| 代理公司： | 南京理工大学专利中心 32203 | 代理人： | 朱显国 |
| 地址： | 222004 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 胃蛋白酶 鉴定 大分子 胶原 蛋白 明胶 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种胃蛋白酶解鉴定大分子胶原蛋白或明胶的方法，其特征在于，步骤如下：
(1)原料溶解：取大分子胶原蛋白或明胶溶于0.1-0.5mol的乙酸中，配成浓度为0.1-10mg/ml的蛋白质溶液；
(2)加热变性：将蛋白质溶液在30-100℃水浴中加热；
(3)加入胃蛋白酶：再在蛋白质溶液中加入胃蛋白酶，胃蛋白酶的用量为大分子胶原蛋白或明胶用量的0.1wt％-10wt％；
(4)酶解反应：将加入胃蛋白酶的蛋白质溶液于水浴中反应10-100分钟，反应温度为10-60℃；
(5)酶解终止：取反应后的溶液1毫升，加入胃蛋白酶抑制剂5-50微升，终止酶解过程；
(6)制备电泳样品：在终止酶解过程的蛋白质溶液中，加入浓度为0.1-10mol/L的三羟甲基氨基甲烷溶液10-100微升，充分混匀后于沸水浴中加热1-10分钟；
(7)电泳样品储存：将沸水浴加热后的样品立即冷却至0℃。
(8)电泳：进行SDS-PAGE电泳试验。
2.如权利要求1中所述的胃蛋白酶解鉴定大分子胶原蛋白或明胶的方法，其特征在于，步骤(2)中的加热时间为10-100分钟。
3.如权利要求1中所述的胃蛋白酶解鉴定大分子胶原蛋白或明胶的方法，其特征在于，步骤(5)中的胃蛋白酶抑制剂采用苯甲基磺酰氟。
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