[发明专利]一种液体植酸酶的制备方法

权利要求书

1.一种液体植酸酶的制备方法，包括如下步骤：

1)将发酵后获得的植酸酶发酵液与麦芽提取液按质量比5-10:2-4均匀混合，28-35℃发酵15-24h,搅拌速度120-180r/m，通风量1-3vvm,得到混合发酵液；

2)向混合发酵液中添加100目-300目硅藻土，用500-800目滤布预涂硅藻土，采用板框过滤机进行过滤，操作压力为0.14-0.24Mpa，得发酵粗酶液；

所述硅藻土的添加量为每100mL发酵液添加0.8-1.2g；

3)将发酵粗酶液于室温下在电场强度30-35kV/cm，脉冲时间300-500μs,脉冲频率200-300Hz条件下进行高压脉冲电场处理；

4)步骤3)经高压脉冲电场处理的发酵粗酶液依次通过孔径为0.4-0.8μm的微滤膜微滤和孔径为0.005-0.015μm的超滤膜超滤，然后循环超滤得到浓缩酶液；

所述微滤进口压力为0.1-0.12MPa，压差0.07-0.09MPa，酶液温度25-30℃；

所述超滤进口压力为0.15-0.20MPa，压差0.08-0.10MPa，酶液温度25-35℃；

5)向浓缩酶液中加入其质量5-12％的稳定剂，充分搅拌，均匀混合，用乳酸调节pH值2.5-5.5，然后于室温下在电场强度35-40kV/cm，脉冲时间400-600μs,脉冲频率200-300Hz条件下进行高压脉冲电场处理，静置20-40min；

6)步骤5)经调配、静置后的浓缩酶液经除菌过滤、无菌灌装即得稳定的液体植酸酶；

步骤5)中所述稳定剂的制备方法如下：按重量份数计，准确称取果胶分解物20-30份，中草药提取物20-30份，改性膳食纤维10-15份，海藻糖8-12份，天然抗氧化剂5-10份，多元醇2-5份，金属氯化物1-3份，牛血清白蛋白0.1-0.3份；首先取改性膳食纤维，加入其质量5-12倍的去离子水，室温浸泡4-6h,边升温边搅拌，40-60℃保温20-30min,搅拌，充分溶解，继续保温，边搅拌边依次加入果胶分解物、中草药提取物、海藻糖、多元醇、金属氯化物，然后降温至25-35℃，边搅拌边依次加入牛血清白蛋白、天然抗氧化剂均匀混合即得稳定剂。

2.如权利要求1所述的液体植酸酶的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述麦芽提取液的制备方法为：将大麦芽、小麦芽和小麦麸按质量比1-3:3-5:6-10均匀混合，粉碎至粒径0.5-1mm,得粉碎麦芽；加入粉碎麦芽质量1-3倍的水，用乳酸调节pH值为3-4，在功率150-300W、频率2000Hz条件下进行微波提取，其中，每次微波辐照总时间60-80s,进行间隔式辐照：辐照10s，间隔10s，控制温度20-35℃，如此辐照10次，同时在功率200-300W,频率30-40KHz条件下进行超声波辅助提取；保温1-3h,然后，在功率200-400W、频率2000Hz条件下进行微波提取，其中，每次微波辐照总时间90-105s,进行间隔式辐照：辐照15s，间隔10s，控制温度40-60℃，如此辐照10次，同时在功率300-500W,频率40-50KHz条件下进行超声波辅助提取；55-65℃保温30-60min；最后自然降温至室温，于电场强度25-35kV/cm，脉冲时间400-600μs,脉冲频率200-300Hz条件下进行高压脉冲电场提取；提取液过滤得第一滤液，加滤渣2倍的水漂洗、过滤得第二滤液，将第一滤液和第二滤液按质量比1:1-3均匀混合即得麦芽提取液。