[发明专利]一种精确鉴定长丰鲫的方法

说明书

技术领域

本发明属于鉴定鱼类物种的生物技术领域，具体涉及一种精确鉴定长丰鲫的方法。

背景技术

银鲫是我国水产养殖种的重要种类，生产上应用的有异育银鲫、方正银鲫、长丰鲫以及众多的银鲫地方种。银鲫在生产中种类较为混杂，各种养殖银鲫形态学均符合国家银鲫标准(GB 16874-2006)，仅仅依靠形态学鉴别长丰鲫同其他鲫鱼是无效的。因此发明精确鉴别长丰鲫和各养殖种群的鉴别方法是必要的，可以较好的保护长丰鲫种质资源以及解决农业生产上的各种商业纠纷。

长丰鲫是中国水产科学研究院长江水产研究所自1991年从普通银鲫中开始进行系统选育。长丰鲫形态与银鲫相同，主要形态构造特征符合银鲫国家标准(GB 16874-2006)。长丰鲫为通过人工选育的的新品种，具有明显的生长优势和抗病性，在生产上应用较为广泛，目前已在市场上广泛流通。

本发明专利提供了精确联合两种方案对长丰鲫进行鉴别的技术方案。本方法利用长丰鲫独特基因信息可以精确区分长丰鲫和其他鲫鱼。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种精确鉴定长丰鲫的方法，该方法简单，准确，可靠，稳定性强，解决了长丰鲫和其他鲫鱼无法精确区分的问题。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

一种精确鉴定长丰鲫的方法，为以下两种方法之一或其结合：

1)比较鲫鱼线粒体NADH4基因中110-866位点序列信息与鲤鱼线粒体基因序列的相似度，相似度为99％或以上为长丰鲫，否则不是。

2)利用流式细胞术进行鲫鱼倍性鉴别，4倍体为长丰鲫，否则不是。

以上所述的方法中，优选的，方法1)具体为：利用引物F：CCTCCTAATTGCCTCCATCA；R：CCCATGTGACTTACGGATGA对鲫鱼的线粒体NADH4基因进行扩增，与SEQ ID NO.1所示序列进行比对，序列相似度99％或以上则为长丰鲫。

以上所述的方法，一种精确鉴定长丰鲫的方法，包括以下步骤：

1)利用引物F：CCTCCTAATTGCCTCCATCA；R：CCCATGTGACTTACGGATGA对鲫鱼的线粒体NADH4基因进行扩增，与SEQ ID NO.1所示序列进行比，序列相似度99％或以上则为长丰鲫，用于进一步的步骤2)的确认；

2)进一步利用流式细胞术进行鲫鱼倍性鉴别，4倍体为长丰鲫，否则不是。

本发明提供的鉴别方法，方法可靠，利用基因信息鉴定稳定性强，可做为法律依据。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

本发明首次针对长丰鲫养殖品种，发明了一种准确对长丰鲫和其他鲫鱼的鉴定技术，弥补了形态学鉴别的不足，为长丰鲫品种保护与解决养殖种的商业纠纷提供了参考。

目前生产上所有的养殖银鲫均为2倍体或者3倍体。经研究发现长丰鲫为4倍体，不同于目前生产上所有的养殖种，利用流式细胞术可以进行初步鉴别。同时在我们对长丰鲫线粒体基因组测序后发现，长丰鲫线粒体NADH4基因中110-866位点连续757个碱基序列为鲤鱼线粒体基因信息，而其他鲫鱼在此位点均为鲫鱼基因信息序列差异达到12％。该位点的鲤鱼基因组信息为长丰鲫独特的基因信息，利用该基因信息，可以精确区分长丰鲫与其他所有鲫鱼种群。可以对于长丰鲫鱼品种种质鉴定以及商业养殖中产生的纠纷提供准确的鉴定依据。

本发明的方法，可准确将长丰鲫与市面上已有的异育银鲫、方正银鲫、滁州鲫以及众多的银鲫地方种。

附图说明

图1为实施例2中鸡血DNA血红细胞相对含量示意图。

图中所示峰值为200。

图2为实施例2中异育银鲫血红细胞DNA相对含量示意图。

图中所示峰值为300。

图3为实施例2中长丰鲫血红细胞DNA相对含量示意图。

图中所示峰值为400。

具体实施方式

本发明所述技术方案，如未特别说明，均为本领域的常规技术。本发明实施例1-3利用了50条长丰鲫和50条异育银鲫中科3号的混合群体，以测定本发明所述技术方案的准确性。实施例1：

一种精确鉴定长丰鲫的方法，包括以下步骤：

长丰鲫线粒体NADH4基因鉴定：

(1)使用TIANGEN基因组DNA提取试剂盒提取长丰鲫DNA，进行PCR反应：

引物为：F：CCTCCTAATTGCCTCCATCA；R：CCCATGTGACTTACGGATGA。

PCR反应体系