[发明专利]产气荚膜梭菌α毒素人源化单链抗体8B

说明书

本发明公开了产气荚膜梭菌α毒素人源化单链抗体8B，它是从噬菌体抗体库Source bioscience筛选出来的，是全人源抗产气荚膜梭菌α毒素抗体，既可以实现中和毒素的治疗作用，同时克服了异源性抗体的多种副作用，免除了异源性抗体进行人源化改造的繁琐步骤和高成本，由于单链抗体分子量小，体内穿透能力强，迅速到达受损组织和细胞发挥抗毒素作用，因此达到经济和高效的双重目的。α毒素与产气荚膜梭菌其他类型毒素具有一定的同源性，该抗体药物有可能对其他类型的毒素具有抑制和治疗效果，也可作为检测试剂检测产气荚膜梭菌α毒素。

技术领域

本发明属于生物工程及疾病防治领域，具体地涉及产气荚膜梭菌α毒素人源化单链抗体8B及其在产气荚膜梭菌α毒素中毒诊断和治疗方法的应用。

背景技术

产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）亦称魏氏梭菌(C.welchii)，为革兰氏阳性菌，外形为两端钝圆的粗大杆状，专性厌氧，有荚膜无鞭毛，是引起人食物中毒、气性坏疽、抗生素相关性腹泻以及动物的肠毒血症和痢疾等疾病的主要病原菌。产气荚膜梭菌一般条件下很难形成芽孢，在无糖培养基中有利于形成芽孢，多数产气荚膜梭菌菌株可形成荚膜，该细菌DNA的G+C mol%为24-27。在基本培养基上能正常生长，适宜的生长温度在37-47℃，呈现出圆形、凸起、光滑、半透明、边缘整齐、无迁徙生长现象。产气荚膜梭菌是一种厌氧菌，分离培养需要特殊的设备和试剂，一般实验室难以开展该菌的研究，因此长久以来国内对厌氧菌及其在食物中毒中的作用也缺少认识，虽然国外有厌氧菌引起的食物中毒的报道，但国内较少见报道，该菌作为一种条件致病菌, 广泛存在于自然界的水源、土壤及人和动物肠道之中。当食入每克含菌量达10⁵以上的污染食品时，即可引起食物中毒，临床表现为恶心呕吐，腹部绞痛，多次腹泻，不发热等现象。到目前为止，已发现的该菌外毒素有16种（α、β、γ、δ、ε、η、θ、ι、κ、λ、μ和ν等），但仅有几种毒素，即α(CPA)、β(CPB)、ε(ETX)、ι(ITX)毒素以及产气荚膜梭菌溶素O（PFO）、肠毒素（CPE）、β2(CPB2)毒素被认为是该菌的主要致病性毒素。根据产气荚膜梭菌产生四种致死性毒素（α、β、ε、ι毒素）的能力，将其分为五种血清类型，即A、B、C、D和E型，其中A型主要引起人类的食物中毒和抗生素相关性腹泻，也可以引起动物的气性坏疽，还可以引起牛、羔羊、驯鹿、仔猪和家兔的肠毒血症；B型菌主要引起羔羊痢疾，还可以引起狗、牛和羊等肠毒血症或坏死性肠炎；C型菌主要是绵羊猝狙的病原菌，也能引起羔羊、牛、仔猪和绵羊的肠毒血症、坏死性肠炎以及人的坏死性肠炎；D型菌引起羊、牛、仔猪以及灰鼠的肠毒血症；E型菌可致犊牛、羔羊肠毒血症，但是很少发生，其中各型均能产生α毒素，可见α毒素是产气荚膜梭菌的主要毒素和致病因子。