[发明专利]一种预防和治疗神经系统疾病的猪脑多肽及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白质多肽领域，具体涉及一种从猪脑中提取的多肽及其制备方法。

背景技术

随着世界人口老龄化，神经细胞毒性损伤导致的疾病也越来越多。特别是像阿尔兹海默病(即老年性痴呆)、帕金森病(PD)等类型的疾病，目前尚没有其病理特征治疗的药物和方法。对于老年痴呆，虽然有些安神、醒脑、镇静的药物具有一定的缓解病症的作用，但疗效并不显著，美国FDA通过治疗老年性痴呆的药物主要有乙酰胆碱酯酶抑制剂和NMDA受体拮抗剂两类，这两类药物仅对中晚期老年性痴呆患者的痴呆症状有所轻度改善和延缓痴呆进展，并无法治愈。大量研究资料表明，肽类可增加记忆能力，具有神经保护作用，通过动物实验证实，在治疗神经损伤方面有良好效果。在神经退行性病变的组织培养中表现出显著地神经保护作用。

神经系统疾病是一个长期慢性疾病，发病过程中特征不明显，常常被忽略导致神经细胞不可逆的损伤，以至于危及生命。因此研发一种天然健康，具有预防神经系统损伤的多肽粉就非常有实用意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪脑多肽，该多肽的分子量在1000～4000道尔顿，多肽中含亮氨酸19％～21％、赖氨酸16％～18％、谷氨酸16％～18％，丙氨酸11％～13％、精氨酸9％～11％，天冬氨酸7％～9％，缬氨酸6％～8％、异亮氨酸6％～8％。

本发明的多肽，是通过以下的方法制备的：

(1)分离提取：取猪脑，加入5％的乙醇水溶液，5％乙酸调pH值至3～5，捣碎，过滤，重复上述操作一次，取滤渣，得胶状物；

(2)水解：取步骤(1)胶状物，控制pH值在7.0～10.0，加入胰蛋白酶，37℃保温5～7小时，90℃加热灭活酶，控制pH值在6.5～7.5、温度在50～60℃，加入木瓜蛋白酶，以速度100～300r/min搅拌0.5～1.5小时，进行反应，保温5～10小时，煮沸5～60min，灭活酶，结束反应，过滤，5000～10000r/min离心，收集上清液，过滤，减压干燥得干粉；。

(3)纯化：取干粉，置于阴离子交换柱，以不同浓度氯化钠溶液梯度洗脱，在波长238nm处测定吸光度，以吸收峰来收集洗脱液，浓缩，干燥，得猪脑多肽。

根据本发明的多肽，所述猪脑为新鲜或冷冻猪脑。

根据本发明的多肽，所述步骤(2)中控制溶液pH值具体实施为：0.1～2.0mol/L氢氧化钠溶液调pH值至7.0～10.0；0.1～2.0mol/L盐酸溶液调pH值至6.5～7.5。

根据本发明的多肽，所述步骤(2)中胰蛋白酶占步骤(1)胶状物重量比为0.3％～0.7％，优选0.5％，木瓜蛋白酶用量为胶状物重量的0.1％～0.5％，优选0.3％。

根据本发明的多肽，所诉步骤(3)中阴离子交换柱填料为DEAE sepharose FF，所洗脱下来的多肽组分为阴离子交换柱中的第2、3、4吸收峰的洗脱组分。

根据本发明的多肽，所诉步骤(3)中氯化钠的浓度为0.1～1.0mol/L。

根据本发明的多肽，所诉步骤(3)中干燥的温度为50℃～55℃。

本发明的多肽对神经细胞培养液中NO及NOS的影响试验表明能够明显降低细胞NO含量及抑制NOS活性。清除自由基试验表明所述多肽有良好的自由基清除能力。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步具体详细描述。

实施例1

取猪脑，加入5％的乙醇水溶液，5％的乙酸水溶液调pH值为4、捣碎，过滤，重复一次，取滤渣，得胶状固形物。取胶状固形物1kg，控制ph值在8.2，加入5g胰蛋白酶，37℃保温6小时，90℃加热灭活蛋白酶，控制pH值在7.1，温度在55℃，加入5g木瓜蛋白酶，以速度300r/min搅拌1.5小时，进行反应，保温6小时；煮沸30min，灭活酶，结束反应，过滤。8000r/min离心，收集上清液。取离心液，微孔滤膜过滤，减压干燥，得干粉，置于阴离子交换柱(DEAE sepharose FF)，以不同浓度氯化钠溶液梯度洗脱。在波长238nm处测定吸光度，收集第2、3、4个吸收峰的洗脱液，浓缩，干燥，得多肽。

实施例2