[发明专利]赖氨酸的发酵及其中所用的设备和部件

权利要求书

1.流加发酵L-赖氨酸的方法，其包括：

（1）将表达吡啶核苷酸转氢酶变体的工程菌接入第一发酵罐于31-38℃培养10-20小时，其中所述吡啶核苷酸转氢酶变体由吡啶核苷酸转氢酶α亚基变体和吡啶核苷酸转氢酶β亚基变体组成，其中吡啶核苷酸转氢酶α亚基变体的氨基酸序列如SEQ ID No:2所示，和，其中吡啶核苷酸转氢酶β亚基变体的氨基酸序列如SEQ ID No:3所示；

（2）将步骤（1）获得的培养液以3-7%（体积）的接种量接种于第二发酵罐，于36-40℃培养3-8小时；

（3）向第二发酵罐持续流加糖，其中糖的每小时流加量为第二发酵罐内培养液量的0.2-0.35%（重量），进行10-18小时；和

（4）向第二发酵罐持续流加糖和氮源，其中糖的每小时流加量为第二发酵罐内培养液量的0.3-0.5%（重量），而且氮源的每小时流加量为第二发酵罐内培养液量的0.1-0.25%（重量），进行30-65小时。

2.权利要求1所述的方法，其中步骤（4）中，向第二发酵罐持续流加糖和氮源，其中糖的每小时流加量为第二发酵罐内培养液量的0.3-0.5%（重量），而且氮源的每小时流加量为第二发酵罐内培养液量的0.1-0.25%（重量），进行50-55小时。

3.权利要求1所述的方法，其中第一发酵罐中的培养基配方为：每18立方米培养基中含，葡萄糖500-750公斤，甘蔗糖蜜50-300公斤，玉米浆400-600公斤，KH₂PO₄ 30-80公斤，MgSO₄·7H₂O 3-15公斤，FeSO₄·7H₂O 0.1-1公斤，MnSO₄·7H₂O 0.1-1公斤，生物素5-30克，和叶酸3-10克。

4.权利要求3所述的方法，其中第一发酵罐中的培养基配方为：每18立方米培养基中含，葡萄糖600公斤，甘蔗糖蜜200公斤，玉米浆520公斤，KH₂PO₄ 45公斤，MgSO₄·7H₂O 7公斤，FeSO₄·7H₂O 0.5公斤，MnSO₄·7H₂O 0.5公斤，生物素12克，和叶酸5克。

5.权利要求1所述的方法，其中第二发酵罐的培养基配方为：每315立方米培养基中含，葡萄糖10000-15000公斤，甘蔗糖蜜50-3000公斤，玉米浆10000-15000公斤，KH₂PO₄ 700-1200公斤，MgSO₄·7H₂O 5-220公斤，FeSO₄·7H₂O 5-25公斤，MnSO₄·7H₂O 5-220公斤，生物素150-300克，和叶酸50-120克。

6.权利要求1所述的方法，其中第二发酵罐的培养基配方为：每315立方米培养基中含，葡萄糖12000公斤，甘蔗糖蜜1000公斤，玉米浆12000公斤，KH₂PO₄ 1000公斤，MgSO₄·7H₂O100公斤，FeSO₄·7H₂O 12，MnSO₄·7H₂O 120公斤，生物素200克，和叶酸85克。

7.氨基酸序列如SEQ ID No:2所示的吡啶核苷酸转氢酶α亚基变体。

8.编码权利要求7所述的吡啶核苷酸转氢酶α亚基变体的核酸。

9.包含权利要求8所述的核酸的载体。

10.包含权利要求8所述的核酸的菌种。