[发明专利]一种基于表面等离子体共振成像生物传感器芯片的蛋白质固定方法

权利要求书

1.一种基于表面等离子共振成像生物传感器芯片的蛋白质固定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)建立用于蛋白质固定的模型；

(2)根据所述模型优化芯片表面的化学修饰；

(3)在芯片上固定蛋白质；

(4)利用表面等离子共振成像来检测固定的蛋白质的信号。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述用于蛋白质固定的模型为：

r=1*DF,]]>

其中l为硫醇直径，r为活性末端之间的平均距离，D_F为活性末端硫醇溶液被同浓度非活性末端硫醇溶液稀释的倍数；

所述用于蛋白质固定的模型的推导过程如下：

A＝a*D_F  (I)

考虑a≈l²并且代入式(I)得到：

A＝l²*D_F  (II)

考虑活性末端硫醇在有效区域的中心，有效区域假设为正方形，所以r可以如下计算：

r≈A---(III)]]>

将式(II)代入式(III)得出所述模型，

其中a为硫醇面积，A为平均一个活性末端硫醇分子所占的有效面积。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述优化芯片表面的化学修饰包括以下步骤：

(A)根据所述模型确定活性末端硫醇溶液被同浓度非活性末端硫醇溶液稀释的倍数D_F；

(B)清洗芯片，氮气吹干，放入等离子体清洗仪中清洗3分钟；

(C)配制混合硫醇溶液：将活性末端硫醇溶液用同浓度非活性末端硫醇溶液稀释D_F倍，制成混合硫醇溶液；

(D)将芯片浸入配制好的混合硫醇溶液中，4℃恒温孵育过夜，取出芯片，清洗芯片表面，氮气吹干，备用。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述活性末端硫醇为羧基末端硫醇、醛基末端硫醇、酰基末端硫醇、环氧基末端硫醇、卤代烃基末端硫醇、氰基末端硫醇或酯基末端硫醇中的任意一种；

优选地，所述非活性末端硫醇为烷基末端硫醇、烷氧基末端硫醇和羟基末端硫醇中的任意一种；

优选地，步骤(B)和步骤(D)中在氮气吹干前所述清洗芯片是用乙醇和去离子水交替清洗。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述优化芯片表面的化学修饰包括优化芯片表面的二维化学修饰和/或三维化学修饰。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述在芯片上固定蛋白质包括以下步骤：

(a)将表面化学修饰优化的芯片浸入芯片表面上活性末端的活化试剂的溶液中进行活化；

(b)用去离子水清洗芯片，氮气吹干，将目标蛋白质溶液在芯片表面打印形成蛋白质阵列；

(c)用2％的牛血清白蛋白的PBS溶液在室温下封闭20分钟，完成芯片上蛋白质的固定。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(b)所述将目标蛋白质溶液在芯片表面打印为手动点样或利用蛋白质打印机进行打印。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(4)所述利用表面等离子体共振成像来检测固定的蛋白质的信号包括以下步骤：

清洗表面打印有蛋白质阵列的芯片，吹干后装入表面等离子共振成像仪，向系统中加入缓冲溶液，调整光学位置以选定点样点，待基线稳定之后，用重生液将芯片表面重生5次，通入待检测溶液，重生，依次通入校正液1和校正液2，检测蛋白质的信号。