[发明专利]一种线性范围更宽的视黄醇结合蛋白测定试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于医学检验领域，具体涉及一种纳米胶乳微粒型的视黄醇结合蛋白测定试剂盒。

背景技术

视黄醇结合蛋白（Retinol binding protein，RBP）是一种单一肽链蛋白质，含有183个氨基酸残基和3个二硫键，相对分子量为21000，半衰期约为3~12小时，属于Lipocalin蛋白超家族成员。RBP是血液中视黄醇（维生素A）的转运蛋白，由肝脏合成、广泛分布于血液、脑脊液、尿液及其他体液中，其主要功能是将视黄醇从肝细胞转运到上皮细胞。血液中RBP主要以视黄醇、前白蛋白结合的复合物形式存在，当复合物中视黄醇与靶细胞结合后，RBP便与前白蛋白分离，自肾小球滤出，由近端肾小管上皮细胞吸收、降解。

近年来的深入研究表明，RBP是低分子量蛋白，能由肾小球自由滤过，近端肾小管几乎完全重吸收，其在血、尿中的含量变化与肾脏疾病密切相关，能够敏感地反映近端肾小管功能和损害程度；同时RBP由肝细胞合成，当肝细胞损伤时，RBP合成受抑制，故检测血液RBP水平，可敏感地反应肝功能的改变。因此，测定RBP含量变化可以早期发现肾功能的改变和肾近曲小管的损害程度，还可作为肝功能早期损害和监护治疗的指标，在肝脏、肾脏疾病的早期诊断和疗效观察中有重要临床意义。

有关检测血清视黄醇结合蛋白的方法主要采用免疫学方法，以酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）、放射免疫测定法（radioimmunoassay，RIA）和颗粒增强透射免疫比浊法（particle-enhanced turbidimetric immunoassay，PETIA）这几种方法为主。ELISA方法虽然在临床上使用了近二十年，但它依然存在一些致命缺点，定量准确性差、操作时间长、自动化程度低，一般只能用于定性检测。RIA灵敏度高，但不稳定，重复性比ELISA差，而且存在放射性污染的危险。PETIA是近年来出现的一种较为稳定、快速、准确测定视黄醇结合蛋白血清浓度的检测方法。PETIA的基本原理是在高分子胶乳微粒的表面交联单克隆抗体，当交联有抗体的微粒与抗原结合后，在短时间内会迅速聚集在一起，改变了反应液的透光性能。而且，反应液透光性能（即吸光度）的改变与被测抗原的浓度有较强的相关性，即胶乳颗粒凝集越多，越会阻碍光线的透光性，反应液的吸光度就越大，在一定范围内与被测抗原的浓度成正比。PETIA检测方法反应时间短，精密度好，检测范围宽，黄疸、溶血和脂血标本均不受影响，易于自动化，是目前使用非常广泛的一种检测方法，但该方法的检测灵敏度和线性范围还有待进一步提高。

目前，PETIA检测试剂所采用的胶乳颗粒多为惰性微粒、羧基化微粒及氨基化微粒。表面修饰的胶乳粒子与抗体的结合是通过其表面的羧基或氨基与抗体的氨基端共价结合，在微粒与抗体之间有一个桥联化学臂，降低了位阻效应，不仅提高了抗体的结合率，而且还为抗体提供合适的三维空间立体结构，有效地保护了抗体与抗原结合的活性区域。国内外已有多家公司提供纳米级表面修饰的微粒粒子原料，并广泛应用于PETIA。这些厂家提供的粒子直径在20nm~4μm，可以作为多克隆抗体和单克隆抗体的载体。纳米级粒子的推出解决了对单克隆抗体结合的能力不强，临床检测的线性范围窄，灵敏度低，干扰因素多，实验稳定性差等问题，大大促进了免疫比浊法在临床上的广泛应用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是进一步提高检测血清中视黄醇结合蛋白含量的分析灵敏度和检测范围；提供一种特异性好，灵敏度高，精密度好，准确度高的纳米胶乳微粒型视黄醇结合蛋白测定试剂盒。

发明解决上述技术问题所采用的技术方案是：一种线性范围更宽的视黄醇结合蛋白测定试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，其中试剂R1和试剂R2的体积比为4︰1。所述试剂R1为促进抗体抗原特异性结合的反应液，组分包括：10~30mmol/L的缓冲液、0.01%~4%（w/v）的增乳剂、0.05%~2%（w/v）的稳定剂、0.1%（w/v）的防腐剂；所述试剂R2为结合有抗人视黄醇结合蛋白抗体纳米胶乳微粒的缓冲液，组分包括：0.1%~0.5%（w/v）标记有抗人视黄醇结合蛋白抗体的纳米胶乳微粒、0.02%~2%（w/v）的稳定剂、10~30mmol/L的缓冲液、0.1%（w/v）的防腐剂。