[发明专利]一种改进的细胞化学融合方法在审
| 申请号： | 201410783452.1 | 申请日： | 2014-12-16 |
| 公开（公告）号： | CN105754986A | 公开（公告）日： | 2016-07-13 |
| 发明（设计）人： | 周涛;孙卫兵;张跃建 | 申请（专利权）人： | 上海复星长征医学科学有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/06 | 分类号： | C12N15/06 |
| 代理公司： | 上海新天专利代理有限公司 31213 | 代理人： | 王巍 |
| 地址： | 200444 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 改进 细胞 化学 融合 方法 | ||
1.一种改进的细胞化学融合方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)将A细胞与B细胞两株细胞混合置于细胞融合管，向融合管内的细胞团滴加0.5ml50％PEG3000～4000溶液，20秒内完成，边加边晃动细胞团，以使细胞团充分接触融合剂PEG溶液；
(2)接着滴加0.5ml50％PEG1500～2500溶液，40秒内完成，边加边晃动融合管，以使细胞团充分接触融合剂PEG溶液；
(3)细胞团于融合管内静置30s至1min，用20～30mlDMEM或PRMI1640终止融合。
2.根据权利要求1所述一种改进的细胞化学融合方法，其特征在于，所述细胞选自A与B两株细胞之间任意组合的融合；所述A细胞和B细胞以2:1-10:1的比列组合。
3.根据权利要求1所述一种改进的细胞化学融合方法，其特征在于，所述A细胞选自Balb/C小鼠B淋巴细胞或昆明小鼠T淋巴细胞；B细胞选自SP2/0骨髓瘤细胞、NS-1骨髓瘤细胞、SP2/0骨髓瘤细胞或X63Ag8.653骨髓瘤细胞。
4.根据权利要求1所述一种改进的细胞化学融合方法，其特征在于，所述步骤(1)PEG3000～4000溶液的pH8.0～8.2，含5％DMSO。
5.根据权利要求1所述一种改进的细胞化学融合方法，其特征在于，所述步骤(2)PEG1500～2500溶液的pH8.0～8.2，含10％DMSO。
6.根据权利要求1所述一种改进的细胞化学融合方法，其特征在于，所述步骤(3)向融合管内加入20～30mlDMEM或PRMI1640溶液终止融合作用。
7.根据权利要求1所述一种改进的细胞化学融合方法，其特征在于，整个融合过程均在37℃水浴中进行。
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