[发明专利]一种新化合物的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及新化合物四霉素P的制备方法及其对植物病原真菌的抑制作用。

背景技术

由不同病原菌引起的作物病害中，约有70%的病害是由真菌引起的。多烯大环内酯类抗生素是一类具有多个共轭双键的抗生素，其紫外吸收呈指状，特征非常明显。根据共轭双键的数目，多烯类抗生素可分为三烯、四烯、五烯、六烯、七烯等5类，通常具有很强的抗真菌活性，且抗真菌谱广，对作物主要病原真菌如黄瓜立枯病菌(Rhizoctonia solani)、番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、番茄早疫病菌(Alternayia solani)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearium)和黄瓜枯萎病菌(F. oxysporum)；对粮食和饲料中常见的霉菌如黄曲霉(Aspergillus flavus)、赭曲霉(A. ochraccus)和黑曲霉(A. niger)，以及酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)等均有活性。据报道该类抗生素目前主要在医药上应用较多，若以多烯大环内酯类化合物为主要活性成分开发成广谱抗真菌生物制剂，将为农业生产提供良好的生防材料。

目前对植物病害的防治，主要采用化学农药杀灭病原菌，但化学农药对人畜的毒副作用和残留问题至今仍难以有效的解决。利用放线菌产生的抗病原真菌的活性物质进行植物病原真菌病害的生物防治，则具有周期短、易于研究、便于生产、无毒无害等优点。

发明内容

本发明从杭州的土壤中分离到一株生防放线菌，并对此生防放线菌发酵代谢产物中的抗菌成分进行分离，得到了主要活性成分，经四大光谱分析，明确了其结构式。该发明为微生物农药的进一步研制和开发提供优良的出发菌株和生物活性化合物。

本发明的目的是针对化学农药不安全与微生物农药种类较少的不足，提供一种新的抗植物病原真菌活性化合物；本发明的另一目的是提供该活性化合物在植物病害上的防治作用。

本发明淀粉酶产色链霉菌的分离、筛选与鉴定：

是于2006 年 8月在浙江杭州临安天目山采集的土样中，经分离、培养、发酵、活性测定以及对抑制植物真菌病害病原菌有效菌株的筛选等步骤获得并保存；经微生物分类学鉴定为淀粉酶产色链霉菌（Streptomyces diastatochromogenes），定名为淀粉酶产色链霉菌（S. diastatochromogenes）D。该菌株已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期2007年5月25日，保藏登记号CGMCC No. 2060。

淀粉酶产色链霉菌D显微形态特征：孢子丝直、钩状、松散螺旋形，孢子长圆、椭圆或卵圆形。

本发明所述的淀粉酶产色链霉菌D，经发酵提取可获得对部分植物真菌病害病原菌具有抑制作用的活性化合物，该化合物的化学名称为（7E, 12Z, 13E, 15E, 17E, 19E）-21-((4-amino-3,5-dihydroxy -6- methyltetrahydro-2H-pyran -2-yl) oxy -12 –ethylidene -1,5,6,25 – tetrahydroxy -11- methyl-9 -oxo-10,27 –dioxabicyclo [21.3.1] heptacosa-7,13,15,17,19-pentaene-24-carboxylic acid，是一种新的四烯大环内酯类化合物，已有文献中未见有报道，中文名称命名为四霉素P，英文名称为Tetramycin P。

本发明目的通过以下技术方案来实现：

一种新化合物的制备方法，按以下步骤进行：

（1）菌种的活化培养：将分离保存的淀粉酶产色链霉菌D菌种移至试管内高氏一号斜面上，在28℃±1℃条件下，培养至试管斜面长满孢子；

（2）发酵培养：发酵培养液为每1000 mL中含有可溶性淀粉20 g，黄豆粉40 g， NH₄Cl 3 g， CaCO₃ 5 g，MgSO₄ 2 g，灭菌，待冷却至50 ℃，在无菌条件下接种淀粉酶产色链霉菌D至发酵培养液中，在 28℃±1℃条件下，培养5天；