[发明专利]D-对氯苯丙氨酸的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种D-对氯苯丙氨酸的制备方法。

背景技术

现在工业上常用的酰胺化酶，都不能长时间的耐受高温，拆分的温度一般都采用37度，以达到酶的最高效率。对一些芳香族和侧链较大溶解度不好的氨基酸，因溶解度小，反应的体积较大，导致工业上浓缩成本的增加和回收的得率偏低。

发明内容

本发明的目的在于克服上述不足，提供一种成本低、收率高、方法简单的D-对氯苯丙氨酸的制备方法。

本发明的目的是这样实现的：

一种D-对氯苯丙氨酸的制备方法，所述方法包括如下步骤：

一、乙酰化D,L-对氯苯丙氨酸的合成：

D,L-对氯苯丙氨酸，溶于水，用碱调节pH到10，温度控制在0-5℃，滴加乙酸酐，反应过程用5N的氢氧化钠控制pH，反应液用茚三酮显色，直到氨基酸不再显色，说明氨基酸全部被乙酰化。加盐酸调节pH到1-2，有大量沉淀的产物出现，过滤收晶体，酸水洗涤，烘干，得率为90%。

二、将乙酰化的D,L-对氯苯丙氨酸，在80℃溶解，浓度可达0.7M,加入纯化的L-耐高温酰化酶，反应，48小时，用液相检测拆分的程度，D-对氯苯丙氨酸被去乙酰化效率可达99%。冷却，加入盐酸到pH1-2,有大量的沉淀出现，过滤得乙酰化的D-对氯苯丙氨酸沉淀。

三、将乙酰化的D-对氯苯丙氨酸沉淀用6N盐酸水解过夜，得到D-对氯苯丙氨酸，再采用重结晶，获得了含量99%，EE值99%以上的高质量D-对氯苯丙氨酸。

所述的纯化的L-耐高温酰化酶的制备时采用基因重组的方法，在大肠杆菌里表达并纯化制备。

所述L-耐高温酰化酶为耐高温L-氨基酰化酶，其在80℃、24小时还有50%的活性。

为了进一步提升品质及收率，重结晶的母液套用4次。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

我们采用基因重组的方法，在大肠杆菌里表达并纯化制备L-耐高温的酰化酶，用于一些溶解度较低的氨基酸的拆分。本专利以D,L-对氯苯丙氨酸为原料，进行乙酰化，然后用纯化的L-耐高温酰化酶拆分制备D-对氯苯丙氨酸，酶的特异性好，效率高，高温酶适用于溶解度较低的芳香族氨基酸的拆分，拆分温度高可以增加底物的溶剂度，可在较高的底物浓度下进行拆分。该方法成本低、收率高、方法简单。

具体实施方式

一种D-对氯苯丙氨酸的制备方法，所述方法包括如下步骤：

一、乙酰化D,L-对氯苯丙氨酸的合成：

D,L-对氯苯丙氨酸，溶于水，用碱调节pH到10，温度控制在0-5℃，滴加乙酸酐，反应过程用5N的氢氧化钠控制pH，反应液用茚三酮显色，直到氨基酸不再显色，说明氨基酸全部被乙酰化。加盐酸调节pH到1-2，有大量沉淀的产物出现，过滤收晶体，酸水洗涤，烘干，得率为90%。

二、将乙酰化的D,L-对氯苯丙氨酸，在80℃溶解，浓度可达0.7M,加入纯化的L-耐高温酰化酶，反应，48小时，用液相检测拆分的程度，D-对氯苯丙氨酸被去乙酰化效率可达99%。冷却，加入盐酸到pH1-2,有大量的沉淀出现，过滤得乙酰化的D-对氯苯丙氨酸。

三、将乙酰化的D-对氯苯丙氨酸沉淀用6N盐酸水解过夜，得到D-对氯苯丙氨酸，再采用重结晶，获得了含量99%，EE值99%以上的高质量D-对氯苯丙氨酸。

所述的纯化的L-耐高温酰化酶的制备时采用基因重组的方法，在大肠杆菌里表达并纯化制备。

所述L-耐高温酰化酶为耐高温L-氨基酰化酶，其在80℃、24小时还有50%的活性。

为了进一步提升品质及收率，重结晶的母液套用4次。