[发明专利]中药中吡咯里西啶生物碱的萃取法

说明书

本发明涉及一种使用疏水性有机溶剂/亲水性醇/盐三液相体系的中药材中吡咯里西啶生物碱萃取方法。其主要优点在于，(1)由疏水性有机溶剂、亲水性醇、无机盐和提取液组成的萃取体系可分成上相、中相和下相三层，体系极性覆盖范围更广，主要由亲水性醇和水组成的中相极性远大于传统疏水性有机溶剂/水两相萃取体系的疏水性上相，有利于极性较强的吡咯里西啶生物碱的富集；(2)与阳离子交换树脂固相萃取相比，回收率更高，操作简单；(3)所用设备和耗材成本低廉，萃取相后续处理过程简单。该方法可实现弱极性、中等极性和强极性天然产物和化工产品的一步萃取富集，尤其是对中药中极性较强的吡咯里西啶生物碱的富集萃取具有明显优势。

技术领域

中药中吡咯里西啶生物碱的疏水性有机溶剂/亲水性醇/盐三液相萃取法

背景技术

吡咯里西啶生物碱(pyrrolizidine alkaloids,PA)是重要的一类植物性肝毒成分，其造成的急性中毒临床表现为肝脏的静脉闭塞症，慢性毒性的典型特征为肝的纤维化坏死等。因上世纪50年代的人畜误食致死事件，而得到国际社会的广泛关注。该类成分主要分布于菊科(千里光属和泽兰属)、紫草科(紫草属)、豆科(猪屎豆属)植物中[MattocksAR.Chemistry and toxicology of pyrrolizidine alkaloids[M].New york:AcademicPress 1986:1-26.]。在我国上述三科的很多植物都作药用，2010版药典一部中现存9种药材品种，包括千里光、款冬花、佩兰、野马追、紫草、蜂蜜、返魂草、一点红和滇紫草，并涉及包括千柏鼻炎片、肺宁颗粒、紫草软膏在内的数十种成方制剂[汤俊，服部征雄，《中国药典》含吡咯里西啶生物碱的中药品种与用药安全，药学学报，2011，46(7)：762-772]。目前只有“千里光”规定药材中的吡咯里西啶生物碱类化合物阿多尼弗林碱 (adonifoline)的含量不得超过0.004％，而大多数品种缺乏该类成分的安全限量检查，其潜在的用药风险可能被忽视，所以明确这些药材和成方制剂中是否含有PA，是关系到用药安全的重要问题。

PA在药材中含量差异极大，从痕量到干重的19％，给PA的分析和制备带来了巨大的困难。目前，从富含PA的药材提取液中萃取PA的方法主要为酸水提取液调碱后的有机溶剂萃取法和阳离子交换树脂固相萃取法(SPE)等。有机溶剂萃取法因操作简单、重复性好、成本低而应用较多，然而，PA的极性强，无论是在碱性条件下的分子态或是酸性条件下的离子态在常用的萃取溶剂，如正己烷、乙酸乙脂、氯仿、正丁醇中的溶解度都有限，致使萃取回收率不高。SPE 法处理后样品纯度相对高，但回收率较低，操作复杂，成本较高，作为大规模的药材分析和制备的前处理技术并不合适。

1990年，Greve和Kula首次报道了由亲水性醇、水和无机盐组成的新型双水相体系，该体系与传统的双水相体系相比，具有极性更强，黏度更低、且廉价、环保等优点。尽管亲水性醇/盐双水相溶剂体系在国内外的研究才刚刚起步，但在强极性中药药效物质和化工产品的萃取富集及蛋白质、多糖等杂质的除去方面已表现出广阔的研究价值和应用空间。如谭天伟院士在国内首先报道了应用乙醇/磷酸盐体系萃取甘草中的甘草酸钾(biotechnology Letter 24(2002) 1417-1420)；修志龙教授将该体系成功应用于发酵液中1，3-丙二醇等化工产品的萃取分离(Separation and Purification Technology 66(2009)：472-478)。我们在已有研究基础上，将疏水性有机溶剂加入到亲水性醇/盐双水相体系中组建由有机溶剂相/亲水性醇相/无机盐相组成的三液相体系，该体系具有极宽的极性覆盖范围，对中药及成方制剂中的PA有非常好的萃取富集效果，同时可有效去除非极性和强极性杂质。目前，疏水性有机溶剂/亲水性醇/盐三液相萃取体系在中药及成方制剂PA的萃取分离方面尚未见文献报道。

发明内容

本发明的目的是针对目前从药材和成方制剂中萃取PA存在的分离能力小，总体收率低、成本高等问题，提供一种由疏水性有机溶剂、亲水性醇、无机盐、药材酸水提取液或酸水分散液上清液组成的三液相萃取方法从中药材和成方制剂中分离PA。