[发明专利]一种从水体中高效浓缩病毒的方法

说明书

本发明公开了一种从水体中高效浓缩病毒的方法。它是将待测水样去除杂质不溶物后，在其中加入足量的Mg²⁺和PO₄³⁺，以形成絮凝物沉淀待测水样中的病毒，然后再经负压抽滤过混合纤维滤膜，取下滤膜，用pH值3.5～4.5的溶液冲洗并溶解滤膜上的凝固物，得到洗涤液，洗涤液再经超滤浓缩，得到病毒浓缩液。本发明的方法除了能高浓缩效率的特点外，还有如下优点：一是快速：絮凝快，洗脱也快；二是比较简便：目前正电荷膜全部依靠进口，材料不易获得，应用本发明的方法，使用任何一种普通的微孔滤膜均可；三是可用于现场快速浓缩病毒：在现场采样时，不需要采取大量水样回到实验室进行检测，只需待水样絮凝静止沉降后，即可获得小体积的初步浓缩样品。

技术领域：

本发明属于病毒浓缩领域，具体涉及一种从水体中高效浓缩病毒的方法。

背景技术：

病毒感染性疾病的传播途径多种多样，但在许多病毒性疾病发生和流行过程中，水是病毒传播的一种重要媒介。许多病毒可以长期存活于水或污水中，并随水流动四处传播。水或污水中的病毒可以通过污染饮用水或食物而被人体摄入、或通过接触粘膜或伤口进入人体、也可以借助气溶胶被人体吸入导致感染。近年来，全球范围内由病毒污染水源引起疾病暴发事件不断发生。据报道，排入环境水体中的病毒多于140种，它们对消毒剂耐受力强、存活时间长、感染剂量低，易于穿透污水及供水处理屏障，进入各种环境水体甚至饮用水系统，威胁人体健康和自然生态系统。近年来，经由地表水和饮用水传播病毒各类疾病的报道很多，水源性传播病毒成为一个严重的公共安全问题。

由于环境水体中可能存在的病毒量少，因而必须通过浓缩数升至数千升的水样至数毫升，提高其中病毒的浓度后再加以检测。但水样中的杂质也一同被浓集，并将干扰后续的检测结果，如浓缩液中的有毒物质可毒害细胞使之死亡而无法感染病毒，其中的腐殖酸等有机物质可干扰PCR使模板无法扩增，因而使检测出现假阴性或假阳性结果。因此，采用有效的前处理方法，浓集病毒并去除干扰杂质是水中病毒检测的关键。

水中病毒的浓缩与细菌不同。细菌的浓缩可完全依靠机械阻留于膜上，而病毒因颗粒直径很小。一般多基于吸附、相分离、强离心沉淀、电泳及免疫化学等作用。已有报告的方法有二类：(1)吸附洗脱法。包括膜吸附法、可沉淀的盐类、氧化铁，聚电电解质吸附方法、氢氧化铝和植物絮凝吸附法和玻璃粉吸附法、相分离法等。(2)以病毒物理学特征为基础的方法，如超速离心法、反渗透法、电渗析法和脱水透析法等。在上述方法中一般认为超速离心及电渗析法等不仅需要一定的设备条件，而且检水量有限，作为辅助手段用于病毒再浓缩是可行的，但在大量水中病毒的浓缩检验中未能广泛应用。聚合物两相分离法适用于定量检验或分离小量浑浊水中的病毒。膜吸附法因操作简单，可检验相当大量的水样，而且随着滤材研究的发展，效能不断提高，研究与应用比较广泛。目前水病毒的浓缩主要采用吸附洗脱法，如阳电膜过滤法，氯化铝沉淀法等，这些方法的回收率都不太高，前者在60％左右，后者<50％。此外，两种方法在洗脱时均需要耗费较长的时间，而且正电荷滤膜需要进口，材料不易获得。特别是在用分子方法进行后续检测时，还存在有机洗脱液可能会分子反应过程产生抑制作用的现象。

发明内容：

本发明的目的是提供一种成本低廉，能够简便高效浓缩病毒的从水体中高效浓缩病毒的方法。

本发明的从水体中高效浓缩病毒的方法，其特征在于，将待测水样去除杂质不溶物后，在其中加入足量的Mg²⁺和PO₄³⁺，以形成絮凝物沉淀待测水样中的病毒，然后再经负压抽滤过混合纤维滤膜，取下滤膜，用pH值3.5～4.5的溶液冲洗并溶解滤膜上的凝固物，得到洗涤液，洗涤液再经超滤浓缩，得到病毒浓缩液。

所述的将待测水样去除杂质不溶物，其可以为离心，优选步骤为：待检测水样在3000r/min转速下离心，取上清。