[发明专利]一种可工业化提取白芸豆中α‑淀粉酶抑制剂的方法

权利要求书

1.一种提取白芸豆中α-淀粉酶抑制剂的方法，其特征在于，主要包括以下步骤：

(1)白芸豆的预处理：浸泡、磨浆，过滤除渣，得到滤液；

(2)静置：将滤液在室温下静置，使淀粉充分沉降，然后离心取上清液；

(3)灭酶：将上清液灭除内源性α-淀粉酶活性，然后离心取上清液；

(4)乙醇沉淀：向上清液中加入无水乙醇适当搅拌，沉淀蛋白质，然后离心取下层沉淀物；

(5)溶解蛋白质：将下层沉淀物中残留的乙醇除去，然后用磷酸盐缓冲液溶解蛋白质，得到蛋白液；

(6)酶解：将蛋白液调至合适的浓度、温度和pH后，加入碱性蛋白酶酶解杂蛋白；

(7)酸沉：用1mol/L的盐酸将酶解液调节至合适的pH进行酸沉，然后离心取上清液；

(8)乙醇沉淀：向上清液中加入无水乙醇，沉淀α-淀粉酶抑制剂，然后离心取下层沉淀物，该沉淀物为α-淀粉酶抑制剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括冷冻干燥的步骤：将步骤(8)中的沉淀物在通风橱中放置1-2h后，于-80℃冷冻干燥48h，超微粉碎后即得粉末状的α-淀粉酶抑制剂产品。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)白芸豆的预处理，是按每100g白芸豆300-500mL蒸馏水的量，将白芸豆于室温下浸泡7-10h后去皮，然后按100g白芸豆600-800mL蒸馏水的量，将白芸豆磨浆，过100目筛去除残渣，得到滤液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)的灭酶是将上清液在70℃水浴灭酶15-30min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)乙醇沉淀，是向上清液中加入无水乙醇至终浓度为70％，在4℃下搅拌2h，然后离心取下层沉淀物，得到蛋白质。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(5)溶解蛋白质，是挥发除去蛋白质中残留的乙醇，然后用0.02mol/L、pH6.9的磷酸盐缓冲液溶解蛋白质，得到蛋白液。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(6)酶解是将蛋白液浓度调整为10-20mg/mL，温度为50-60℃，pH为6.5-7.5，碱性蛋白酶的添加量为2-6U/g蛋白质，酶解时间为2-4h。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(7)酸沉，是用1mol/L的盐酸将酶解液调节至pH3.0-5.5，于4℃下静置1-2h，然后离心取上清液。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(8)乙醇沉淀，是向上清液中加入无水乙醇至终浓度为70％，在4℃下搅拌2h，然后离心取下层沉淀物。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法主要包括如下步骤：

(1)浸泡去皮：按每100g白芸豆300-500mL蒸馏水的量，将白芸豆于室温下浸泡7-10h后去皮；

(2)磨浆：按100g白芸豆600-800mL蒸馏水的量，将白芸豆磨浆，过100目筛去除残渣，得到滤液；

(3)静置：将滤液在室温下静置2-3h，使淀粉充分沉降，然后离心取上清液；

(4)灭酶：将上清液在70℃水浴灭酶30min，然后离心取上清液；

(5)乙醇沉淀：向上清液中加入无水乙醇至终浓度为70％，在4℃下搅拌2h，然后离心取下层沉淀物，该沉淀物为蛋白质；

(6)溶解蛋白质：将蛋白质在通风橱中放置1-2h以挥发去除残留的乙醇，然后用200-400mL的0.02mol/L、pH6.9的磷酸盐缓冲液溶解蛋白质，得到蛋白液；

(7)酶解：将蛋白液调至蛋白液浓度为10-20mg/mL，温度为50-60℃，pH为6.5-7.5，加酶量为2-6U/g蛋白质，酶解时间为2-4h，得到蛋白酶解液；

(8)酸沉：用1mol/L的盐酸将酶解液调节至pH3.0-5.5进行酸沉，于4℃下静置1-2h，然后离心取上清液；

(9)乙醇沉淀：向上清液中加入无水乙醇至终浓度为70％，在4℃下搅拌2h，然后离心取下层沉淀物，该沉淀物为α-淀粉酶抑制剂；

(10)冷冻干燥：将沉淀物在通风橱中放置1-2h后，于-80℃冷冻干燥48h，超微粉碎后即得粉末状的α-淀粉酶抑制剂产品。