[发明专利]依那西普的稳定液体制剂

说明书

本发明涉及一种依那西普(重组p75sTNFR：Fc融合蛋白)的稳定的液体制剂，具体地，涉及一种液体制剂，其包含一种或多种选自下组的稳定剂：甲硫氨酸、赖氨酸、组氨酸及其药学上可接受的盐，稳定剂的含量足以降低储存过程中依那西普副产物的形成。本发明的液体制剂有效减少依那西普副产物的产生，从而稳定维持其在长期储存中的药效。因此，无需在给药之前进行重建，无菌制剂可给予患者以确保患者安全性。因此，其适用于需要依那西普治疗的领域。

本申请是申请日为2012年06月01日、申请号为201280026919.7、发明名称为“依那西普的稳定液体制剂”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种依那西普(etanercept，重组p75sTNFR：Fc融合蛋白)的稳定的液体制剂，具体地，涉及一种液体制剂，其包含一种或多种选自下组的稳定剂：甲硫氨酸、赖氨酸、组氨酸及其药学上可接受的盐，稳定剂的量足以降低储存过程中依那西普副产物形成。

背景技术

依那西普是一种生物炎症调节剂，其作为TNF-α的竞争性抑制剂，结合细胞表面TNF-α受体，抑制TNF-α介导的免疫反应。依那西普是分子量约150kDa的大分子，是两个Fc融合蛋白通过二硫键连接的同型二聚体，其中各Fc融合蛋白由偶联于人免疫球蛋白G亚类1的Fc部分的人可溶性p75TNF受体构成(Goldenberg，Clinical Therapeutics，21(1)：75-87，1999；Moreland等人，Ann.Intern.Med.，130(6)：478-486，1999)。

该原型融合蛋白最早在20世纪90年代初由Bruce A.Beutler(德克萨斯大学西南医学中心，University of Texas Southwestern Medical Center)合成，并在2002年由安进公司(Amgen)以依那西普(Enbrel)为商品名上市。依那西普是一种TNF-α抑制剂，用于治疗类风湿关节炎、银屑病和强直性脊柱炎，并为治疗脉管炎、阿尔茨海默病和克罗恩病而进行临床试验。

与蛋白药物相似，抗体药物具有非常短的半衰期，不利的温度、剪切应力、振动、冻融、紫外线照射、过度的pH变化、有机溶剂和微生物污染易于引起化学和物理变性。化学变性包括二聚体离解、氧化、脱酰胺化、异构化和多聚化，受到构成抗体的氨基酸和含有抗体的溶剂条件(盐、pH和温度)的影响。物理变性包括丧失三级结构、单体的共价/非共价凝聚和粘附，受到由包含抗体的周围环境，如溶剂，复杂的蛋白结构，如电荷分布以及热稳定而改变的蛋白表面疏水区域(patch)的影响。抗体的物理或化学变性导致其生理活性丧失。由于变性是不可逆的过程，一旦变性，抗体可能无法将其天然性质恢复至初始状态，从而导致其疗效降低。还有提示说单体聚集引起免疫反应。因此，对含有生理有效量的抗体但无聚集体的制剂已进行了许多研究(Ishikawa等，Biol.Pharm.Bull.，33(8):1413-1417，2010；Levin等编，《治疗性单克隆抗体产品的发展》(The Development of TherapeuticMonoclonal Antibody Products)，波士顿(马萨诸塞州)：BPTC公司(BioProcessTechnology Consultants,Inc)，第9章)。

防止液体制剂中蛋白质变性有许多方法可用。在某些蛋白药物中，通过冻干解决稳定性问题。例如，美国专利号7,592,004公开了达利珠单抗(daclizumab)的冻干制剂，其用5至25mM的组氨酸缓冲液(pH 5.5至6.5)，0.005至0.03％的非离子表面活性剂(聚山梨醇酯)和100至300mM的非还原性糖(蔗糖)使之稳定。美国专利公开号2010-0158925公开了西妥昔单抗的冻干制剂，其用组氨酸缓冲液和乳糖酸(lactobionic acid)使之稳定。然而，冻干过程产生冷冻和干燥应激(stress)，如冰晶形成、pH变化以及高浓度的溶质，这些应激可导致抗体变性。此外，由于冷冻干燥过程在生产中需要大容量的冻干机，大规模生产时生产成本升高。在使用前将冻干产品在无菌水性介质中溶解使之重建也带来不便。