[发明专利]利用SNP标记鉴别蜂群抗白垩病性状的方法

权利要求书

1. 一种利用SNP标记鉴别蜂群抗白垩病性状的方法，其特征在于鉴别步骤如下：

（1）蜜蜂幼虫取样：从考察的意大利蜜蜂蜂群中，随机收集3日龄的蜜蜂幼虫，每群20只蜜蜂幼虫代表整个蜂群，每个个体放在一个1.5 ml 离心管里，于-20℃冷冻备用；

（2）幼虫样本DNA的提取：分别将步骤（1）的冷冻幼虫进行组织破碎，提取幼虫DNA，并进行浓度和纯度测定；

（3）鉴定引物序列如下：

Primer-F：5’-GTCAAGGTATCACAAGCGTCA-3’

Primer-R：5’-ATAGTTCGCCCACGACCA-3’

扩增产物目的片段大小为465bp；

（4）PCR检测： 以步骤（2）幼虫DNA为模版，以Primer-F和Primer-R为引物进行PCR；

反应的体系为：总体积25ul，内含反应混合物Mix 12.5ul，Primer-F 0.6ul，Primer-R 0.6ul，DNA模版 1ul，ddH₂O 10.3ul；

反应的条件为： 94 ℃预变性4min；94℃变性30 s，58℃退火30 s，72℃延伸1 min，共35个循环；72℃延伸8 min；

对PCR反应产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，将出现目的条带的PCR反应液进行测序；

（5）鉴别蜂群抗白垩病性状：将步骤（4）的测序结果用Sequencher软件进行序列比对分析，根据蜂群的C等位基因频率P_C值，鉴别蜂群抗白垩病性状。

2.根据权利要求1所述的一种利用SNP标记鉴别蜂群抗白垩病性状的方法，其特征在于蜂群的C等位基因频率P_C > 54%，则此蜂群为抗白垩病蜂群。

3.根据权利要求1所述的一种利用SNP标记鉴别蜂群抗白垩病性状的方法，其特征在于所述SNP标记为蜜蜂幼虫抗白垩病相关的基因组位点C2587245T。