[发明专利]一种家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查方法

说明书

技术领域

本发明属于蚕业养殖育种领域，具体涉及一种家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查方法。

背景技术

家蚕微粒子病是由家蚕微粒子原虫（Nosema bombycis）引起的一种传染性蚕病。家蚕微孢子虫不仅可以通过食下感染家蚕，还能够通过胚种从母代感染到子代，进而入侵家蚕各组织，最终导致家蚕死亡。由于迄今为止尚无有效的治疗方法，该病一旦发生则对蚕业生产尤其是蚕种生产造成巨大经济损失。培育抗病品种可能成为解决家蚕微粒子疫病的最为有效的途径。

随着分子生物学技术的进步，分子标记和转基因技术在抗病品种选育得到广泛应用，利用转基因技术、诱变或杂交创新育种材料是提高抗性品种选育的快速有效手段。

开展蚕微粒子病抗性品种选育，首先需要设计一种可靠稳定的筛查方法，确保调查数据的真实性、结果可重复。目前育种单位普遍采用将各个品种家蚕分开进行群体人工感染来检测其对于蚕微粒子病的抗性，然而该方法存在着一定的不足，主要在于群体中每个个体的病原吸收量与其桑叶的摄取量存在相关性，而个体间的桑叶摄取量存在差异，导致实验数据存在较大误差，同时群体饲养容易造成个体间蚕微粒子的交叉感染，对实验结果产生影响，而且该方法选用的试验用蚕并没有限定其蚕龄期，蚕龄期大的培育时间长，导致筛查周期较长，不利于快速育种筛查。

发明内容

为了解决上述问题，本发明公开了一种家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查方法，以解决现有的家蚕微粒子抗性筛查方法存在的个体间病原摄取量差异较大、育种结果数据存在误差的问题，提供了一种严格控制单体病原摄入量的家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查方法，该方法能够明显减小同一品种家蚕单体间的相互影响，使得筛查结果更加准确可靠，缩短抗蚕微粒子病蚕种育种筛查所用周期。

一种家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查方法，其主要步骤包括：

步骤一：以家蚕品种“大造”作为对照，选取几种试验用蚕，饲养至3龄起蚕，选取大小均一的起蚕放入28孔昆虫饲育盒中，每头蚕单孔放置；

步骤二：用切桑工具准备直径为1.0 cm的桑叶圆片，使用移液枪吸取3-7μl家蚕微孢子虫病原液涂抹于桑叶表面，所述家蚕微孢子虫病原液的浓度为10⁵-10⁷个/mL,晾干后放入饲育盒，每头一片；

步骤三：4h之后，选择吃完桑叶的蚕作为进一步试验用蚕，每个品系分3组，每组分3个重复区，每区50头，继续进行单体饲养；

步骤四：12天后，进行磨蚕镜检，调查每个品系的感染头数； 

步骤五：记录各组感染率，通过家蚕的感染率了解各种质对于家蚕微粒子病的抗性，以此筛选出抗性优良的种质。

作为一种优选方式，步骤一中，选用3龄眠起后8-12h的起蚕。

作为一种优选方式，步骤二中，选择桑叶切片时尽量远离主叶脉，叶面无缺口和孔洞。

作为一种优选方式，步骤二中，将蚕微粒子病原液涂抹于桑叶上时，应将3-7μl蚕微粒子病原液用移液枪滴于桑叶的背面，并用玻璃棒涂抹开来。

作为一种优选方式，步骤四中，试验用蚕若在12天内（进行磨蚕镜检前）发生死亡，通过镜检确定其致病菌。

本家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查方法通过将每个品种的家蚕进行单体饲养，其具体操作方法为严格控制每头试验用蚕的蚕微粒子感染桑叶的食用量，保证各个蚕龄期试验用蚕的初始蚕微粒子病原的摄入量一致，避免出现个体间因食桑量差距所产生的育种结果的误差，同时将每头试验用蚕进行单体饲养，防止试验用蚕之间长时间接触发生交叉感染的概率，保证实验结果的可靠性，以更加有效的方式在不同品种的家蚕中挑选出对蚕微粒子病抗性较高的蚕种，提高育种的可重复性和可信度。

本筛查方法根据3龄蚕的食量对其蚕微粒子感染桑叶的食用量也进行了相应的调整，以蚕能够在4h内吃完为准。选用3龄蚕作为本方法的实验用蚕，主要是因为该蚕龄期的家蚕已经具备一定体型，易于操作，且培养时间较短，可以缩短筛查周期。2龄蚕体型较小，会加大操作难度，进行病原感染桑叶的摄入时可不好控制桑叶量，而选用4、5龄蚕的话则会延长实验用蚕的饲养时间，从而延长了家蚕微粒子病抗性种质的快速筛查所需的周期，所以3龄蚕为本筛查方法的最佳操作蚕龄期。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。