[发明专利]检测蜱传脑炎病毒感染血清的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学领域中检测蜱传脑炎病毒感染血清的试剂盒。

背景技术

蜱传脑炎病毒(Tick-borneencephalitisvirus，TBEV)，又名森林脑炎病毒， 属于黄病毒科黄病毒属。TBEV感染后机体可引起森林脑炎，森林脑炎是一种以侵袭中 枢神经系统为主的疫源性急性传染病，急性期症状表现为高烧时伴随剧烈头痛、外周 性弛缓性麻痹等症状，严重时伴随吞咽困难，语言系统障碍。治疗后，常留下瘫痪、 肢体活动障碍等后遗症，严重威胁人民的健康。目前TBEV感染的血清学检测还没有商 品化的试剂盒。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何检测人的血清是否被蜱传脑炎病毒感染。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了检测蜱传脑炎病毒感染的荧光素酶免疫 共沉淀试剂或试剂盒1。

本发明所提供的检测蜱传脑炎病毒感染的荧光素酶免疫共沉淀试剂或试剂盒1， 所述试剂或试剂盒1含有由蜱传脑炎病毒抗原和海肾荧光素酶组成的融合蛋白；所述 蜱传脑炎病毒抗原名称为EVRP，为下述I1)或I2)的蛋白质：

I1)SEQIDNo.1的第320-412位氨基酸所示的蛋白质；

I2)在SEQIDNo.1的第320-412位的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添 加一个或几个氨基酸残基得到的具有相同功能的由I1)衍生的蛋白质。

上述试剂或试剂盒1中，所述融合蛋白名称为EVRP-Rluc，为下述K1)或K2)的 蛋白质：

K1)序列表中SEQIDNo.1所示的蛋白质；

K2)在SEQIDNo.1的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨 基酸残基得到的具有相同功能的由K1)衍生的蛋白质。

其中，SEQIDNo.1由412个氨基酸组成，SEQIDNo.1的第320-412位氨基酸为 所述蜱传脑炎病毒抗原的氨基酸序列，SEQIDNo.1的第1-311位氨基酸为海肾荧光 素酶的氨基酸序列，SEQIDNo.1的第312-319位氨基酸为连接肽的氨基酸序列。

上述试剂或试剂盒1中，所述融合蛋白按照下述S1)和S2)的方法制备：

S1)将所述融合蛋白的编码基因导入真核细胞中，得到重组细胞；

S2)表达所述重组细胞的蛋白得到所述融合蛋白；

所述融合蛋白的编码基因为如下C1)或C2)或C3)所示的核酸分子：

C1)序列表中SEQIDNo.2所示的核酸分子；

C2)与C1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码相同功能蛋白 的cDNA分子或基因组DNA分子；

C3)在严格条件下与C1)限定的核苷酸序列杂交，且编码相同功能蛋白的cDNA 分子或基因组DNA分子。

其中，SEQIDNo.2由1236个核苷酸组成，编码氨基酸序列是SEQIDNo.1的蛋 白质。SEQIDNo.2的第958-1236位核苷酸编码SEQIDNo.1的第320-412位氨基酸 所示的蜱传脑炎病毒抗原；SEQIDNo.2的第1-933位核苷酸编码SEQIDNo.1的第 1-311位氨基酸所示的海肾荧光素酶；SEQIDNo.2的第934-957位核苷酸编码SEQID No.1的第312-319位氨基酸所示的连接肽。

这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本 发明的SEQIDNo.2所示的核苷酸序列具有75％或更高，或85％或更高，或90％或更高， 或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用 计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价 相关序列之间的同一性。

上述试剂或试剂盒1中，所述严格条件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃ 下杂交并洗膜2次，每次5min，又于0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交 并洗膜2次，每次15min。

上述75％或75％以上同一性，可为80％、85％、90％或95％以上的同一性。

为解决上述技术问题，本发明还提供了所述融合蛋白的制备方法。

本发明所提供的所述融合蛋白的制备方法，包括下述S1)和S2)的步骤：