[发明专利]一种具有抗肿瘤活性的海带多糖的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多糖的制备方法，具体涉及一种从海带中提取具有抗肿瘤活性的海带多糖的方法。

背景技术

海带(Laminaria Japonica Aresch)是褐藻门海带目海带科海带属的大型海藻。海带富含多种功能性成分，具有极高的食用和药用价值，其药用价值在《本草纲目》、《神农本草经》和《食物本草》等传统医书中都已有记载。研究表明海带的多种生物功能大多与海带中的生理活性多糖有关，如免疫调节、抗肿瘤、抗凝血、降脂、降糖、抗氧化等。

对于具有抗肿瘤活性的海带多糖的制备方法也有很多学者进行了研究和探讨，传统方法主要为酸提取法、碱提取法、酶提取法等。这些制备方法都存在一定的缺陷。酸提可造成多糖水解碱提取法造成多糖生物活性降低。酶提取法耗时，工业生产需要使用的酶量大，成本高。热水提取醇沉的方法简便，但是耗时耗能。脱除多糖中蛋白的方法有三氯乙酸沉淀法及savage法等，利用三氯乙酸沉淀蛋白，多糖收率较高，但常伴有糖链降解；savage法采用氯仿及戊醇等有机试剂使蛋白变性、沉淀，其处理条件温和，能较好的避免多糖降解，但处理效率低，多糖损失严重。如中国专利CN103421126A，公开了一种提取海带多糖的方法，将海带洗净后，晒干、粉碎、过筛后浸泡到水中，经过水提和超声波浸提，然后再醇沉，得到海带多糖沉淀，最后将沉淀烘干，即的粗品的海带多糖，该方法得到海带多糖含量低。如中国专利CN102367282B，公开一种具有抗肿瘤活性的海带多糖的制备方法：海带粉碎后加水，调节pH值至1-4，在100-120℃下提取2-5小时，过滤，得提取液，用含有钾的碱调节提取液pH值至6.3-7.0将提取液浓缩至固形物含量为35-48％的浓缩液，浓缩液中加入乙醇，混合均匀后在4℃下静置4-12小时，过滤，得多糖沉淀，冷冻干燥，得到海带多糖。采用该方法，得到的多糖含量比较低，而且整个工序时间长。

近年来，虽然国内外学者已经对海带多糖的提取分离纯化进行了研究，并取得了一定进展，但针对多糖的特定药理活性，研究较少，这在一定程度上制约了海带多糖的精深加工与应用。

发明内容

本发明提供了一种具有抗肿瘤活性的海带多糖的制备方法。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种具有抗肿瘤活性的海带多糖的制备方法，包括下述步骤：

1)原料处理：将海带，粉碎或打碎；

2)超高压处理：粉碎或打碎后的海带中加入40-60倍重量份的纯净水，压力350MPa，作用温度70-85℃，超高压处理2-5min，完成后过滤，收集滤液；

3)超声波处理：将步骤2)得到滤液，超声波处理5-10min，作用温度70-85℃，功率为300W，完成后过滤，收集滤液；

4)褐藻酸盐的去除：用浓度为1.5M的盐酸溶液调节步骤3)得到滤液的pH值为1.2，在转速12000r/min下离心20min，收集上清液；

5)脱色：向步骤4)得到的上清液中加入相当于上清液重量2倍的质量浓度为95％的乙醇，4℃静置4h，过滤，上清液中加入上清液重量0.5％的活性碳，80℃保温25-35min进行脱色，抽滤，收集滤液；

6)去除蛋白、干燥：向步骤5)得到的滤液中加入相当于滤液重量2倍的质量浓度为95％的乙醇，4℃静置4h，过滤，向滤液中缓缓加入醋酸钾稀溶液至终浓度2mol/L，4℃静置过夜，离心10-15min，沉淀进行冷冻干燥得海带多糖。

本发明所述的海带为新鲜或干制后的海带。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

1、本发明采用超高压处理海带原料，在预定压力保持一段时间,使原料细胞内外压力达到平衡(有效成分达到溶解平衡)后迅速卸压,使细胞内外渗透压力差突然增大,细胞内的有效成分穿过细胞膜(细胞膜的结构在超高压下发生变化),转移到细胞外的提取液中,达到提取目标成分的目的。超高压提取避免了因长时间高温而引起的有效成分的变化、损失以及生理活性的降低，同时因为超高压是在密闭的环境下进行的，没有溶剂的挥发，不会对环境造成污染。是一种安全有效的提取活性物质的方法。

2、本发明在采用超高压处理原料后，接着再采用超声波提取，超声波提取利用的是强烈的机械剪切作用，促进多糖的溶出，本发明通过采用两种提取方式的结合，一方面缩短了提取时间，另一方面提高了产品得率，采用本发明的方法，多糖含量98.5％以上，提取率70％以上。