[发明专利]干扰LCYB、LCYE表达同时异位表达TT8在制备红色花瓣芸薹属植物中的应用

权利要求书

1.干扰芸薹属植物花瓣中β-环化酶基因LCYB、ε-环化酶基因LCYE表达同时异位表达TT8基因在制备花瓣呈红色的芸薹属植物品种中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述干扰芸薹属植物花瓣中β-环化酶基因LCYB、ε-环化酶基因LCYE表达的序列如SEQ ID NO.2所示，所述异位表达TT8基因的序列如SEQ ID NO.3所示。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述干扰芸薹属植物花瓣中β-环化酶基因LCYB、ε-环化酶基因LCYE表达的序列由拟南芥花瓣特异启动子PAtAP3介导表达，所述花瓣特异启动子PAtAP3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1第267位至第1044位所示。

4.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于：所述芸薹属植物为甘蓝型油菜(Brassica napus)。

5.干扰芸薹属植物花瓣中β-环化酶基因LCYB、ε-环化酶基因LCYE表达同时异位表达TT8基因的植物表达载体，其特征在于：所述植物载体包括由花瓣特异启动子介导的表达β-环化酶基因LCYB、ε-环化酶基因LCYE RNA干扰序列的表达框和由组成型启动子介导异位表达TT8基因的表达框。

6.根据权利要求5所述的植物表达载体，其特征在于：所述花瓣特异启动子介导表达β-环化酶基因LCYB、ε-环化酶基因LCYE的RNA干扰序列的表达框依次由花瓣特异启动子PAtAP3、SEQ ID NO.2所示的序列、间隔序列、SEQ ID NO.2所示的反向互补序列和NOS终止子组成。

7.根据权利要求5所述的植物表达载体，其特征在于：所述由组成型启动子介导异位表达TT8基因的表达框依次由CaMV35S启动子，SEQ ID NO.3所示序列和NOS终止子组成。

8.权利要求5-7任一项所述植物表达载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将SEQ ID NO.1所示序列经AscI和SwaI双酶切后连入经同样酶切的pFGC5941M质粒，得pFGC5941CEPE质粒，然后将SEQ ID NO.2所示的序列连入pFGC5941CEPE载体的PAtAP3启动子与间隔序列之间，形成中间载体pFGC5941CEPE-B2RNAia，再将SEQ ID NO.2所示序列反向连入中间载体pFGC5941CEPE-B2RNAia的间隔序列与OCS终止子之间，得pFGC5941CEPE-B2RNAi载体，最后将SEQ ID NO.3所示序列通过NcoI和AscI酶切位点连入经同样酶切的pFGC5941CEPE-B2RNAi载体，得干扰芸薹属植物花瓣中β-环化酶基因LCYB、ε-环化酶基因LCYE表达同时异位表达TT8基因的植物表达载体。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：所述间隔序列为甘蓝型油菜PAP2基因第2内含子。

10.利用权利要求5-7任一项所述植物表达载体制备花瓣呈红色的芸薹属植物品种的方法，其特征在于，包括如下步骤：

a.将权利要求5-7任一项所述植物表达载体转化农杆菌，制得工程菌；

b.将步骤a所得工程菌转化芸薹属植物无菌苗的下胚轴，共培养后，在Basta除草剂抗性

下诱导分化获得再生苗，筛选阳性苗转基因苗得花瓣呈红色的芸薹属植物品种。