[发明专利]一种黄酒混浊敏感蛋白特异性去除效果的评价方法

权利要求书

1.一种黄酒混浊敏感蛋白特异性去除效果的评价方法，其特征在于，所述方法是先向黄酒中添加澄清剂、收集澄清剂吸附的蛋白，使用Tricine-SDS-PAGE技术比较混浊敏感蛋白与澄清剂吸附的蛋白的分子量的分布，然后使用MALDI-TOF/TOF MS技术鉴定混浊敏感蛋白与澄清剂吸附的蛋白的种类，最后利用凯氏定氮法测定澄清剂处理前后的黄酒酒体总氮含量；所述评价方法是指如果MALDI-TOF/TOF MS鉴定结果表明混浊敏感蛋白与澄清剂吸附的蛋白的种类一致，说明混浊蛋白得到特异性去除，反之没有，同时根据总氮含量降低的量来衡量澄清剂对混浊敏感蛋白去除效果的大小。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述收集澄清剂吸附的蛋白是指离心经澄清剂处理的黄酒，收集沉淀、洗涤沉淀、氨水溶解沉淀，离心去除澄清剂后于上清中添加硫酸铵来沉淀蛋白，将沉淀悬浮、脱盐透析、冷冻干燥，得到的蛋白质样品即为澄清剂吸附的蛋白。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述氨水溶解沉淀是采用体积分数0.1％～2％的氨水进行溶解。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述硫酸铵来沉淀蛋白是缓慢添加硫酸铵至饱和度达到60％～100％。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述脱盐透析是采用截留分子量为3500～8000Da的透析袋进行脱盐透析。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述离心是指黄酒添加澄清剂后静置2～5天，倾去上层清液，然后在相对离心力为8000～17800g下，离心10～30min。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述使用Tricine-SDS-PAGE技术先将采用Bradford法测定澄清剂吸附的混浊蛋白浓度；所述Tricine-SDS-PAGE技术使用的分离胶浓度为16％，浓缩胶浓度为5％。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述与澄清剂吸附的蛋白进行比较的混浊敏感蛋白的获取方式是：黄酒自然存放至出现混浊沉淀，收集沉淀物、洗涤沉淀、氨水溶解沉淀，然后用硫酸铵沉淀蛋白后经脱盐透析、冷冻干燥，即得到混浊敏感蛋白样品。

9.根据权利要1-7任意所述的方法，其特征在于，所述方法具体包括：

(1)向黄酒中添加澄清剂，静置2～5天后，倾去上层清液，将剩下的黄酒用力与沉淀混匀，在相对离心力为8000～17800g时离心10～30min，收集沉淀；

(2)用3～5倍体积的去离子水洗涤沉淀，离心收集沉淀，再用3～5倍体积的氨水体积分数为0.1％～2％的氨水溶解澄清剂吸附的蛋白；

(3)离心除去澄清剂，向上清液中缓慢添加硫酸铵直至饱和度达到60％～100％，离心收集沉淀；

(4)将沉淀悬浮于3～5倍体积的去离子水中，将混悬液盛入截留分子量为1000～8000Da的透析袋进行脱盐透析，冷冻干燥，得到蛋白质样品；

(5)将得到的蛋白质样品溶于蛋白裂解液，Bradford法测定混浊蛋白浓度，通过Tricine-SDS-PAGE技术分析黄酒混浊蛋白质和澄清剂吸附的蛋白质分子量分布；

(6)然后利用MALDI-TOF/TOF MS技术鉴定澄清剂吸附的蛋白是否与混浊敏感蛋白一致，从而评价混浊敏感蛋白是否得到特异性去除；

(7)利用凯氏定氮法测定黄酒酒体中的总氮含量，并且根据总氮含量降低的量来衡量澄清剂对混浊敏感蛋白去除效果的大小。

10.一种黄酒澄清剂的选择方法，其特征在于，所述方法是指用权利要求1所述评价方法来评价一种以上澄清剂对黄酒混浊敏感蛋白的特异性去除效果，选择相对效果最好的澄清剂。