[发明专利]紫杉醇免疫原、抗紫杉醇特异性抗体和紫杉醇检测试剂

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及紫杉醇免疫原、抗紫杉醇特异性抗体和紫杉醇检测试剂。

背景技术

紫杉醇(Paclitaxel)，其结构式如式(Ⅲ)所示：

紫杉醇是从植物红豆杉(又名紫杉)中提取得到的三环二萜生物碱类药物，具有独特的诱导微管蛋白聚合从而抑制细胞分裂的抗肿瘤作用，是目前治疗乳腺癌、子宫癌、卵巢癌及非小细胞肺癌等癌症的临床一线用药。但紫杉醇具有骨髓密度减小、过敏反应、嗜中性粒细胞减少、低血压、心动过缓、恶心和呕吐等副作用，治疗效果与其血药浓度具有高度的相关性。因此，通过监测患者体内紫杉醇的浓度水平，可以有效地控制和减轻这些副作用，达到最理想的治疗效果，对于临床合理用药具有重要意义。

目前，国内外监测紫杉醇血药浓度的主要方法是酶联免疫吸附法(ELISA)、高效液相色谱法(HPLC)、反相高效液相色谱法(RP-HPLC)、液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)等传统方法，但是这些方法都不适合临床大规模应用。国内虽然已有应用胶乳增强免疫比浊法的紫杉醇测定试剂盒上市，但是远不能满足日益增长的临床检测需求。目前市场上缺乏稳定性好、灵敏度高、特异性强的紫杉醇检测试剂，尤其是质量好的自动化检验试剂，因此，研发生产质量达到临床要求、实用性强、性价比高，可应用于全自动生化分析仪的紫杉醇测定试剂已成为国内外体外诊断试剂行业的热点。

发明内容

本发明为了克服现有技术存在的缺陷，采用全新的紫杉醇衍生物制备免疫原性强的紫杉醇免疫原及其抗体，用该抗体制备的紫杉醇均相酶免疫检测试剂可以实现在全自动生化分析仪上对紫杉醇高通量、快速化的检测。该检测试剂具有操作简便、灵敏度高、特异性强、结果准确等优点，还能有效降低紫杉醇检测成本，有利于临床推广使用。

本发明的一个目的在于提供一种紫杉醇衍生物。

本发明的另一个目的在于提供一种免疫原性强的紫杉醇免疫原。

本发明的另一个目的在于提供一种紫杉醇免疫原的制备方法。

本发明的又一个目的在于提供使用本发明紫杉醇免疫原制备得到的特异性强的抗紫杉醇特异性抗体。

本发明的再一个目的在于提供一种紫杉醇检测试剂。

免疫原性与所合成的紫杉醇衍生物分子结构及所选载体种类有关，现有技术中紫杉醇免疫原的免疫原性较弱，所得到抗体的特异性、与紫杉醇的结合力，敏感度都不如本发明。本发明的紫杉醇免疫原，免疫原性高，可以诱导得到高效价的抗紫杉醇特异性抗体。该抗体特异性高，与紫杉醇的结合力强。由该抗体制备得到的紫杉醇检测试剂，可以快速、准确地确定样品中的紫杉醇含量。本发明是通过以下技术方案实现的：

一种紫杉醇免疫原，其结构式如式(Ⅰ)所示：

式中，R为连接基团-CO-(CH₂)_n-COO-，n是1至20之间的整数，优选R为-CO-(CH₂)₂-COO-。

载体为具有免疫原性的蛋白质或多肽，优选为血清蛋白、血蓝蛋白和甲状腺球蛋白，更优选为血清白蛋白，进一步优选为牛血清白蛋白。

当R为-CO-(CH₂)_n-COO-时，该紫杉醇免疫原的合成途径和方法如下：

1.紫杉醇衍生物的制备方法：

一种紫杉醇衍生物，其结构式如式(Ⅱ)所示：

式中，R为连接基团-CO-(CH₂)_n-COO-，n是1至20之间的整数。

(1)称取1g紫杉醇、2g化合物A加入反应体系中，然后用20ml吡啶或者干燥的苯在连续回流的玻璃烧瓶中进行孵育。

(2)将此反应混合物在70-80℃的回流温度下持续加热6小时，然后将反应混合物缓慢冷却至室温，轻轻倒去多余的吡啶或苯。

(3)将剩余的有机成分在负压条件下持续通入氮气流使其蒸发干燥，得到的干燥残留产物即为紫杉醇衍生物。

(4)将上述得到的产物用蒸馏水配制的60％乙醇冲洗10次以上，以获得紫杉醇半琥珠酸脂(紫杉醇衍生物)的重结晶。