[发明专利]一种以羊油为原料制备类可可脂的生物转化法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种以羊油为原料制备类可可脂的生物转化法，属于微生物技术领域。

背景技术

由于天然可可脂来源不足，世界上对天然可可脂的需求存在严重的供需矛盾，以致天然可可脂价格非常昂贵，使用天然可可脂的一些产品也因此有更高的附加值，如巧克力制品，国内外不同档次的产品价格是非常悬殊的。诸多不利因素迫使人们开始了天然可可脂替代品的研究。

市场上广泛销售的类可可脂主要是经分提调配技术制取。国内早在80年代就有将乌桕脂(POP含量高)、茶油(OOO含量高)的分提物与其他油脂进行调配制备可可脂替代品的专利。然而，这种调配方法成本还是很高，人们也一直在尝试采用更易得的廉价原料以制备组分相似、性能优良的类可可脂。目前，利用酯交换反应改变原料中甘油酯的组成，是生产类可可脂的最热门的方法。现今酶法合成类可可脂，主要是利用具Sn-1，3定向催化特性的脂肪酶催化Sn-2位富含油酸油料作物和富含棕榈酸或硬脂酸酰基供体进行酯交换反应，从而获得目的产物。由于目前国内外还没有发现具Sn-2定向催化特性的脂肪酶，因此用作酯交换反应的底物大都是Sn-2位富含油酸的不饱和度脂肪酸含量高的植物油，动物油含有大量的饱和脂肪酸，不适合用酯交换反应来实现这一应用，然而正是由于动物油的这一特性，现在越来越少人食用动物油，动物油价格低廉，而且作为屠宰业的副产品利用率低。如果能通过发酵动物油方法大量培养产类可可脂的微生物，就可望在短期内获取大量的微生物类可可脂产品，对天然可可脂供需矛盾的解决无疑是一大贡献。目前利用动物油脂为原料的相关报道还较少。

一些产油酵母能利用底物在胞内产生大量脂质，而且这种酵母脂质有一个特点，就是Sn-2位富含大量的不饱和脂肪酸，特别是油酸。羊油的脂肪酸组成与可可脂的脂肪酸组成接近，但是羊油甘油三酯的Sn-2位油酸含量低(55％左右)，要把羊油转化为类可可酯的关键是要提高羊油甘油三酯的Sn-2位油酸含量。酵母脂质的这一结构特点对于羊油改性成类可可脂是非常有利的。

耶氏解脂酵母能分泌一种胞外酶，水解培养基中的羊油并且吸收利用， 在胞内积累大量的脂质，大多数是甘油三酯(＞90％，w/w)，并且根据其在商业规模发酵的表现和极佳的安全记录，有极大的潜力在食品工业中成为油脂生产的细胞工厂。

发明内容

本发明的目的是建立一种将价格低廉的羊油转化为经济价值高的类可可脂的生物发酵方法。

本发明是通过以下技术方案实现的。

本发明涉及一种以羊油为原料制备类可可脂的生物转化法。

所述方法所用的种子培养基组成：葡萄糖20g/l，蛋白胨20g/l，酵母提取物10g/l。

所述方法所用发酵培养基中羊油和硬脂酸甲酯的质量比为0.6-1.5。

所述方法涉及的羊油与硬脂酸甲酯在加入发酵培养基之前要加入1％的吐温80，用超声破碎仪超声乳化15-20min，且乳化后的羊油和硬脂酸甲酯单独灭菌后加入到灭菌的发酵培养基中。

所述方法所用的发酵培养基组成如下：KH₂PO₄ 7g/l.Na₂HPO₄ 2g/l，MgSO₄·7H₂O 1.5g/l，CaCl₂·2H₂O 0.1g/l，FeCl₃·6H₂O 0.008g/l，ZnSO₄·7H₂O 0.001g/l，CuSO₄·5H₂O 10^-4g/l.MnSO₄·5H₂O 10^-4g/l，羊油与硬脂酸甲酯的质量比为0.6-1.5，10-50g/L，作为碳源，氮源为1.5g/l酵母提取物和3g/l酒石酸铵。

所述方法所用的酵母为产油酵母，Y.lipolytica ClCC1778。

该发明的步骤如下。

1)种子培养：按照酵母菌液与种子培养基体积比1∶2000-1∶5000进行接种，温度：25-30℃；摇床转速：150-250rpm；培养时间：16-24h，得到一种种子培养液；其中，酵母菌液的OD值为2.0。