[发明专利]非编码小RNA分子miR-101在制备治疗鼻咽癌的药物的应用

说明书

技术领域

本发明涉及非编码小RNA分子miR-101的新用途，尤其是涉及miR-101在制备治疗鼻咽癌的药物的应用。

背景技术

MicroRNA（miRNA）是一类非编码单链小RNA分子，可以通过与靶基因3’非翻译区域(3’-UTR)结合，从而抑制靶基因翻译成蛋白质，进而在细胞、组织或个体水平上影响细胞生长、凋亡和分化及生物体的生长发育，并参与多种疾病的发生发展过程。值得注意的是，miRNA在血清中也稳定的存在，表明它们具有作为癌症生物标记的潜在可能性。MiR-101是一种肿瘤抑制miRNA，它有两个前体，分别位于人的1号染色体和9号染色体中，但其成熟序列在各个物种中高度保守。已有文献报道miR-101在许多肿瘤包括前列腺癌、乳腺癌、肾癌、肝癌及子宫内膜癌等表达下调，具有抑制肿瘤细胞转移侵袭的能力，然而尚未有miR-101在鼻咽癌中作用的报道。

鼻咽癌是我国南方及东南亚地区好发的头颈恶性肿瘤之一，放射治疗是其主要的治疗手段。虽然近年来临床技术已有很大发展，鼻咽癌尤其是晚期鼻咽癌患者的预后仍不令人满意，而辐射抵抗是其中的一个重要原因。因此，近年来的鼻咽癌治疗主要集中于控制鼻咽癌的复发和转移。鼻咽癌的辐射增敏是一个非常复杂的生物学过程，其中包括凋亡、自噬、信号通路的异常活化等。尽管目前的研究已有一些进展，但鼻咽癌辐射增敏的机制尚不完全明确。

STMN1 (Stathmin1)由Sobel A等在1983年首先报道，是近年研究较多的一种微管解聚磷蛋白，通过磷酸化水平的自身调节在细胞的有丝分裂期和分裂间期影响微管动力系统平衡，参与许多信号通路的调控。STMN1 在许多肿瘤组织中表达上调，STMN1 高表达与肿瘤的恶性程度、侵袭和远处转移有关，并与肿瘤患者对一些化疗药物的反应和不良预后相关。

发明内容

本发明的目的在于提供非编码小RNA分子miR-101的新的药物应用。

非编码小RNA分子miR-101的成熟体序列由以下核苷酸组成：5’-UACAGUACUGUGAUAACUGAA-3’（miRBase网站检索）。

本发明所述的应用是非编码小RNA分子miR-101在制备治疗鼻咽癌的药物的应用。

根据本发明所述的应用的进一步特征，提供了非编码小RNA分子miR-101在制备通过靶向STMN1增强鼻咽癌的辐射敏感性的药物的应用。

根据本发明所述的应用的进一步特征，所述通过靶向STMN1增强鼻咽癌的辐射敏感性的药物是抑制鼻咽癌细胞增殖的药物。

根据本发明所述的应用的进一步特征，所述通过靶向STMN1增强鼻咽癌的辐射敏感性的药物是抑制鼻咽癌细胞自噬的药物。

本发明的研究表明，miR-101在鼻咽癌细胞中低表达，人工高表达miR-101后可抑制鼻咽癌细胞的增殖，并提高鼻咽癌细胞对辐射的敏感性。本发明还确定了Stathmin 1 (STMN1)是miR-101的直接靶基因，并确定了miR-101通过靶向STMN1增强鼻咽癌的辐射敏感性。本发明为miR-101/STMN1通路在鼻咽癌辐射增敏作用中的分子机制提供了新的见解，为miR-101/STMN1通路用于鼻咽癌的药物制备和治疗提供了新的理论依据，因此可以将miR-101用于制备治疗鼻咽癌的药物，尤其是制备通过靶向STMN1增强鼻咽癌的辐射敏感性的药物。

本发明通过在鼻咽正常上皮细胞株NP69及鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2、5-8F和6-10B中检测 miR-101的表达量，发现miR-101在鼻咽癌细胞中低表达，从中选出2株miR-101表达量最低的鼻咽癌细胞株CNE-2和5-8F，在其中人工过表达miR-101以检测其功能。

一、采用Trizol试剂提取细胞总RNA，进行反转录，利用qRT-PCR检测miR-101在鼻咽癌细胞株中的表达。研究发现，与正常鼻咽上皮细胞相比，miR-101在鼻咽癌细胞系中表达量显著降低。从中挑选miR-101表达量最低的细胞株CNE-2和5-8F，给予不同剂量的照射后，发现鼻咽癌细胞中miR-101的表达升高。

二、miR-101增强鼻咽癌细胞的辐射敏感性。

将miR-101 mimic或阴性对照miR-NC转染至鼻咽癌细胞CNE-2和5-8F中，MTT实验检测其转染后第1-5天的细胞活力，结果发现与对照组相比，过表达miR-101后，细胞活力明显下降。同上方法处理CNE-2及5-8F细胞后，将鼻咽癌细胞进行不同剂量照射。结果发现，高表达miR-101的鼻咽癌细胞存活分数明显下降。