[发明专利]一种HCV包膜蛋白基因及应用

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，涉及一种HCV包膜蛋白基因及应用。

背景技术

目前全球约有1.7亿慢性丙型肝炎病毒感染者和患者，占全球人口的3％。其中中国约有4000万感染者。丙型肝炎最大的特点是慢转率很高，急性感染者当中约80％感染者会转变成慢性肝炎，其中约20％慢性肝炎患者会发展为肝硬化，肝硬化病人中又有1％-4％人最终会发展成肝癌，所以说目前全球约有1.7亿慢性丙肝患者面临着发生肝硬化和肝癌的风险。世界范围的高感染率，高度的慢转率和治疗手段、疫苗的缺乏使HCV成为研究的热点。

与其他RNA病毒一样，HCV有着一个具有较低保真性和缺乏校正功能的RNA依赖的RNA聚合酶。所以HCV具有高度的变异性，甚至是同一患者的同一份儿血清的不同分离株间就存在着核苷酸序列或氨基酸序列的差异。实际上每个患者血清中的病毒都是由基因序列高度同源、又有微小差别的病毒组成的病毒群构成，HCV的这种特点就是准种。所以目前HCV已有7个进化分枝(1、2、3、4、5、6、7)包括11个基因型(1a、1b、2a、3a、3b、4a、5a、6a等等)和100多个基因亚型。HCV基因型与亚型在世界各地区间存在着相对流行差异。我国大陆主要流行的是有1b、2a、6a三型，以1b型为主，近些年6a亚型的比例有上升的趋势，主要在艾滋病患者和吸毒者人群中多见。

人类和黑猩猩是HCV的天然宿主，现在仍缺乏有效地小动物模型，细胞培养滴度低，所以假病毒技术就显现出了其诸多优点。对于传染性强、致病性高、不易培养的HCV病毒，假病毒技术是一种行之有效的相对安全的研究手段。

HCV基因组全长约9600bp，编码4种结构蛋白(核心蛋白C、包膜蛋白E1、E2、p7)和6种非结构蛋白分别是(NS2，NS3，NS4a，NS4b，NS5a，NS5b)。其中包膜蛋白E1E2是丙型肝炎病毒表面的主要组成部分。它们是HCV与外界环境、宿主的免疫系统或肝细胞(主要的靶细胞)表面直接接触的部位。E1E2蛋白上存在许多表位，尤其诱导中和抗体的抗原表位正位于E2的高变区。由于HCV包膜蛋白基因的高突变率，所以应采用特异性的假病毒型别对不同地区不同人群来源的患者血清进行中和抗体检测，。但目前文献报道的假病毒，其包膜蛋白基因主要来源于标准株序列，检测特异性存在局限，且假病毒包装效率低，不能满足中和抗体评价(疫苗评价)等后续实验。此外，不同亚型的假病毒包装效率存在明显差异，目前的研究资料显示5a最好，1b、2a、6a最差；而我国流行的恰好是1b、2a、和6a。因此，建立针对我国人群感染的HCV假病毒库具有非常重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的存在的上述缺陷，提供一种HCV包膜蛋白基因及应用。具体为：

1、建立基于HCV中国分离株不同亚型的假病毒，为HCV感染早期特性(包膜蛋白的功能、病毒进入细胞的潜在受体及丙型肝炎病毒假病毒宿主嗜性)研究、中和抗体水平和实验性疫苗免疫效果评价提供有效模型。

2、收获的高感染性假病毒颗粒，可用于抗病毒药物的体外筛选、疫苗免疫效果的评价及中和抗体的评价，进而为HCV防治提供支持。

其具体技术方案为：

一种HCV包膜蛋白基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明所述HCV包膜蛋白基因在HCV假病毒包装，研究HCV包膜蛋白的功能、病毒进入细胞的潜在受体及丙型肝炎病毒假病毒宿主嗜性，以及评价来自于丙型肝炎病人血清的中和抗体与实验性疫苗的抗体应答等研究中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本发明采用RT-PCR、套式PCR技术，获得我国流行的HCV1b亚型包膜蛋白基因，构建带有HCV1b亚型不同胞膜蛋白基因的表达载体，双质粒共转染方法建立假病毒库，筛选出高感染性假病毒颗粒，进而为研究抗HCV药物的筛选及HCV疫苗免疫效果评价提供有效模型。同时也可以进一步研究HCV感染早期特性(包膜蛋白的功能、病毒进入细胞的潜在受体及丙型肝炎病毒假病毒宿主嗜性等)，以及评价来自于丙型肝炎病人血清中和抗体与实验性疫苗的抗体应答等提供技术平台。

附图说明

图1是本发明技术方案原理图；

图2是相对荧光素酶活性值比较结果图，其中366为HCV-1b亚型编号，St为1b国际标准株，Hebei为1b中国标准株；